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流式細胞儀的主要技術(shù)指標及應(yīng)用范圍

2011年01月04日 09:35:52人氣:2445來源:上海源葉生物科技有限公司

(一)熒光測量靈敏度
靈敏度的高低是衡量儀器檢測微弱熒光信號的重要指標,一般以能檢測到單個微球上zui少標有異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC)或藻紅蛋白(phyloerythrin,PE)熒光分子數(shù)目來表示,現(xiàn)在的FCM均可達到600個熒光分子。

(二)分辨率
分辨率的高低是衡量儀器檢測量精度的指標,通常用變異系數(shù)(CV)值來表示:
CV=D/M×l00%(其中D是分布的標準差,M是分布的平均值)
如果一群含量*相等的樣本用FCM來測量,理想的情況下,CV為0;用FCM測量曲線表示為垂直于橫軸的直線。但是在整個系統(tǒng)檢測中會帶人許多誤差,其中樣本含量本身的誤差、樣本在流進照射光區(qū)域的微量變化、再加上儀器本身的誤差等,實際得到的是一呈正態(tài)分布的曲線,CV值越小則曲線分布越窄越集中,測量誤差就越小,一般的FCM在*狀態(tài)時CV值均<2%。CV值除了采用以上的計算公式外,還可用半高峰寬來計算,半高峰寬指在峰高一半的地方量得的峰寬,它與CV值有以下的關(guān)系:
CV=半高峰寬/M×0.4236X100%
上述公式建立在正態(tài)分布的條件下,而實際數(shù)據(jù)分布常常是非對稱圖形,故采用半高峰寬所計算得到的CV值要明顯小于統(tǒng)計公式得到的CV值,在實際應(yīng)用中應(yīng)引起注
意。

(三)前向角散射光檢測靈敏度
靈敏度是指能夠檢測到的zui小顆粒大小,目前FCM可以測量到0.2—0.5mm。

(四)FCM的分析速度
分析速度是以每秒可分析的細胞數(shù)來表示,當細胞流過光束的速度超過FCM儀器響應(yīng)速度時,細胞產(chǎn)生的熒光信號就會被丟失,這段時間稱為儀器的死時間。死時間越短,則儀器的處理速度越快,一般可達3 000~6 000/s,大型機已達到每秒幾萬個細胞。

(五)FCM分選指標
分選指標包括分選速度、分選純度及分選收獲率。分選速度指每秒可提取的細胞數(shù)。目前臺式帶分選儀器的分選速度約為300/s;大型機約為每秒上萬個。分選純度指被分選出細胞所占的百分比,目前大型機與小型機分選純度均可達到99%。分選收獲率指被分選出的細胞與原來溶液中該細胞的百分比。通常情況下,分選純度和收獲率是互相矛盾的,純度高,收獲率下降,反之亦然。這是由于樣本在流液中并不是等距離一個接一個有序地排列,而是隨機的。一旦兩個不同細胞相距得很近時,在強調(diào)純度和收獲率不同條件下,儀器會作出取舍的決定。因此,選擇不同模式要視具體實驗要求而定。

流式細胞儀的應(yīng)用范圍 自20世紀70年代以來,隨著流式細胞技術(shù)水平的不斷提高,其應(yīng)用范圍也日益廣泛。流式細胞術(shù)已普遍應(yīng)用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、細胞生物學(xué)、細胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。

目前國內(nèi)外FCM在醫(yī)學(xué)臨床及科研中的應(yīng)用主要有以下幾方面:①監(jiān)測細胞免疫狀態(tài);②組織配型與監(jiān)控移植的排斥反應(yīng);③白血病的診斷及療效觀察;④遺傳性血小板疾病的診斷;⑤細胞DNA定量及細胞周期的分析;⑥細胞凋亡的檢測;⑦細胞特異性標志物的測定;⑧細菌的鑒定。

 

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