產(chǎn)品編號：CSB-E04787h

特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的人MBP抗體，且與其他相關蛋白無交叉反應。

有效期：6個月

預期應用：ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關生物液體中MBP 抗體含量。

1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。

2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。

4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。

用純化的MBP蛋白抗原包被微孔板，制成固相載體，向微孔中分別加入待測樣品，然后再加入辣根過氧化物酶標記抗人的抗體進行反應，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的MBP Ab呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品中抗體的效價（抗血清zui終能顯色的zui高稀釋倍數(shù)記為效價）。

1.         酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2.         樣品稀釋液（Sample Diluent）：2×20ml/瓶。

3.         辣根過氧化物酶標記二抗（HRP-anti-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

4.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

5.         濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

6.         終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H₂SO4）。

1.         標準規(guī)格酶標儀

2.         高速離心機

3.         電熱恒溫培養(yǎng)箱

4.         干凈的試管和Eppendof管

5.         系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器

6.    蒸餾水，容量瓶等

1.         血清：全血標本請于37° C放置1小時或4° C過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.         血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.         細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。

臨用前用樣品稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100μl），實際配制時應多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記二抗加990μl樣品稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。

實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋。

1.         加樣：分別設空白孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔加待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應60分鐘。

2.         棄去液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔。每孔加辣根過氧化物酶標記二抗工作液 100μl（按1μlHRP標記抗體加99μl樣品稀釋液的比例配制，輕輕混勻）。

3.         溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。

4.         依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見陽性孔內(nèi)有明顯藍色，即可終止）。

5.         依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

6.         用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。

注：

1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。

2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H₂SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。

3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。

4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標記二抗工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標記二抗工作液。

5. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。

洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

為檢測樣品中MBP蛋白抗體效價，客戶可以采取樣品2倍倍比稀釋樣品計算抗體效價，一般采取以1:40為起始稀釋倍數(shù)（使用樣品稀釋液進行稀釋）。zui大稀釋倍數(shù)根據(jù)客戶自身試驗要求而定，zui終顯色與陰性對照孔進行比較，有明顯差異的zui大稀釋度定為抗體的zui終效價。

1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

5. 底物請避光保存。

6. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

 

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