鋅指核酸酶（zincfinger nucleases, ZFNs）被設(shè)計(jì)為類似于熱跟蹤導(dǎo)彈，地導(dǎo)向以便找到并切割特異性DNA序列。然而，它們偶爾可能會(huì)剪錯(cuò)位點(diǎn)，導(dǎo)致未曾預(yù)料到的裂口。Nature雜志子刊發(fā)表了兩篇論文描述了兩種系統(tǒng)性地找到這種脫靶作用（off-target action）的方法，從而能夠有朝一日有助于設(shè)計(jì)出避免間接傷害的基因治療。美國(guó)斯克利普斯研究所拉由拉市分所（The ScrippsResearch Institute in La Jolla）化學(xué)生物學(xué)者Carlos Barbas（未參與該項(xiàng)研究）說(shuō)，“直到現(xiàn)在還沒(méi)有一種真正綜合性的方法來(lái)定義ZFN的特異性”，“當(dāng)我們開(kāi)始利用ZFNs治療病人和修飾基因組時(shí)，我們需要知道這些修飾是在哪些序列位點(diǎn)進(jìn)行的”。

鋅指（zinc fingers, ZFs），是因?yàn)樗鼈兊慕Y(jié)構(gòu)像只一個(gè)指頭伸出的手而得名，結(jié)合到不同的三字母核苷酸序列。通過(guò)將幾個(gè)鋅指出串聯(lián)在一起，再加入一個(gè)切割DNA的核酸酶，研究人員們能夠地導(dǎo)向?qū)⒈磺懈畹奶禺愋曰?。這種特異性就為開(kāi)發(fā)ZFN基因治療提供可能。確實(shí)，一家制藥公司Sangamo Biosciences正在人類安全性試驗(yàn)中測(cè)試一種治療HIV的候選藥物，其中該試驗(yàn)利用一種ZFN修飾HIV用來(lái)侵入細(xì)胞的T細(xì)胞受體CCR-5。但是它不是一個(gè)的系統(tǒng)：有時(shí)這種分子可能結(jié)合并剪斷一種不同但又幾乎相同的DNA序列，從而潛在性地殺死細(xì)胞。
 

為了系統(tǒng)性地描述這些脫靶切割位點(diǎn)，哈佛大學(xué)化學(xué)生物學(xué)者David Liu和他的同事們利用1000億個(gè)DNA片段組成的文庫(kù)---一些片段在人類基因組中出現(xiàn)---對(duì)兩種ZFN進(jìn)行測(cè)試。大多數(shù)情況下，這些核酸酶切割靶位點(diǎn)，但是它們偶爾也切割其他類似序列---包括一種與癌癥信號(hào)傳導(dǎo)途徑相關(guān)聯(lián)的基因。

Liu說(shuō)，“對(duì)我們論文的膚淺理解可能導(dǎo)致一個(gè)人對(duì)ZFNs持悲觀態(tài)度，但是實(shí)際上我是樂(lè)觀的”。他說(shuō)，除了證實(shí)脫靶裂口所占份額會(huì)隨著較低濃度的ZFNs下降外，研究人員們還發(fā)現(xiàn)使用與靶序列結(jié)合較差的ZFNs似乎產(chǎn)生更少的意料之外的裂口。這就表明有可能設(shè)計(jì)出使得這些脫靶效應(yīng)zui小化的ZFN治療。

在第二篇發(fā)表在 Nature Biotechnology雜志上的研究論文中，研究人員們給人白血病細(xì)胞施加一種切割CCR-5受體的ZFN。他們首先構(gòu)建結(jié)合到DNA裂口末端的帶有標(biāo)記的病毒顆粒，然后利用這些病毒顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，來(lái)鑒定ZFN切割位點(diǎn)，結(jié)果他們發(fā)現(xiàn)ZFN總體上結(jié)合到靶CCR-5 DNA序列。但是，它大約2萬(wàn)分之一的概率切割序列幾乎相同的另一個(gè)受體基因，以及甚至更低概率地切割少數(shù)幾個(gè)其他的類似序列。但是Sangamo BioSciences公司科技總監(jiān)Phillip Gregory以及這篇研究論文的共同作者Phillip Gregory說(shuō)，這些結(jié)果都是在研究人員們采用一種極度高濃度的ZFN和極易允許ZFN作用的細(xì)胞系的條件下進(jìn)行的，目的是觀察zui糟糕的情形會(huì)是什么樣子。他說(shuō)，即便是在這些條件下，低概率的脫靶切割事件“證明我們的期望：ZFNs蛋白定會(huì)是高度特異性的”，而且暗示在臨床中采用更低藥用劑量將幾乎不可能發(fā)生脫靶切割。

Barbas說(shuō)，這些方法可能有朝一日用于早期藥物開(kāi)發(fā)以便篩選特異性的候選藥物。他說(shuō)，人們不清楚這些新ZFN測(cè)試的覆蓋面是否剛剛好。比如，采用帶有標(biāo)記的病毒顆粒的方法可能會(huì)遺失一些脫靶切割，因?yàn)椴《緲?biāo)記可能并不結(jié)合到每個(gè)單裂口。再者，Barbas補(bǔ)充道，不同于試管中的DNA，細(xì)胞DNA緊密纏繞成染色質(zhì)，因而在試管方法中發(fā)現(xiàn)的很多結(jié)合位點(diǎn)可能在活細(xì)胞得到保護(hù)并且從不會(huì)被ZFNs切割。還說(shuō)，盡管這些新的測(cè)試方法可能成為早期藥物開(kāi)發(fā)的關(guān)鍵性工具，但是一幅完整的ZFN脫靶位點(diǎn)圖僅當(dāng)花費(fèi)1000美元獲得一個(gè)人的全部基因組序列的情況下才會(huì)出現(xiàn)，屆時(shí)研究人員們能夠?qū)邮躗FN治療的人們進(jìn)行測(cè)試以便找到每個(gè)脫靶裂口。