環(huán)保在線APP
環(huán)保在線手機站
環(huán)保在線小程序
微信公眾號
上海滬宇生物科技有限公司作者
試劑和器材：
1. OptiPrepTM（600g*，ρ=1.32g/ml）；
2. OptiPrepTM稀釋劑（OptiPrepTM diluent，OD）：150mmol/L KCl、30mmol/L MgCl2、120mmol/L*基*-KOH，pH7.8；
3. 勻漿介質（HM）：0.25mol/L蔗糖、25mmol/L KCl、5mmol/L MgCl2、20mmol/L*基*-KOH，pH7.8；按要求向OptiPrepTM稀釋劑和勻漿介質中加入蛋白酶抑制劑；
4. 高轉矩橋式電動機（半導體開關控制）；
5. Potter-Elvehjem勻漿器，20—40ml，孔隙約0.07mm；
6. 高速離心機，帶可容納15—50ml離心管的吊桶式轉子；
7. 注射器，帶金屬*（內徑約0.8mm）；
8. 尼龍濾網。
實驗方法：
所有操作在0—4℃下進行。
1. 制備500g/L*工作液：每5倍體積OptiPrepTM用1倍體積的OptiPrepTM稀釋劑來稀釋；
2. 梯度溶液：用勻漿介質（分別為6倍體積+4倍體積和7倍體積+3倍體積）來稀釋500g/L*工作液以制備300g/L和350g/L的兩種*梯度溶液。保持于冰上。
3. 切除肝臟并用剪刀剪切成微小碎塊；
4. 將大約一半肝臟轉移到Potter-Elvehjem勻漿器的20ml勻漿介質中，并用研杵研磨約8次，在約500r/min轉速下旋轉以破碎組織；
5. 對另一半肝臟切碎物重復以上操作；
6. 用尼龍濾網過濾；
7. 通過與等體積的500g/L*工作液混合將勻漿液調整到250g/L*；
8. 將10—15ml勻漿液轉移到50ml管中，從300g/L和350g/L的*梯度溶液中各取10ml加到勻漿液之下；
9. 在100000g下離心20min；
10. 細胞核在300g/L和350g/L*界面上成帶，用注射器和金屬*吸取細胞核；
11. 用2倍體積的勻漿介質稀釋懸液，在2000g下離心10min沉淀細胞核。
原文地址:/biotech/exp/molbio/Molecular/2011/x816372438.html
關鍵詞：高速離心機
全年征稿/資訊合作
聯(lián)系郵箱：hbzhan@vip.qq.com
- 版權與免責聲明
- 1、凡本網注明"來源：環(huán)保在線"的所有作品，版權均屬于環(huán)保在線，轉載請必須注明環(huán)保在線，http://www.niunang.cn。違反者本網將追究相關法律責任。
- 2、企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術文章、資料下載等內容，如涉及侵權、違規(guī)遭投訴的，一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔責任，本網有權刪除內容并追溯責任。
- 3、本網轉載并注明自其它來源的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網贊同其觀點或證實其內容的真實性，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時，必須保留本網注明的作品來源，并自負版權等法律責任。
- 4、如涉及作品內容、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內與本網聯(lián)系，否則視為放棄相關權利。
環(huán)保在線官微
環(huán)保在線APP
環(huán)保在線小程序