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移液器操作技巧

2012年03月05日 11:05:49人氣:3055來源:上海勁馬實驗設備有限公司

前言:移液結果會很容易受到使用技法的影響。為了獲得*結果,需要采用良好的移液技法。本系列教育電子快訊將向您介紹關于獲得*性能的技巧和竅門。

技巧 1:一致性
在按壓與釋放定位銷時,需要保持一致的節(jié)奏、速度和技法。
吸液速度過快會導致套柄與活塞噴濺、產(chǎn)生氣霧以及受到污染,甚至導致樣品量損耗。
一致性可使準確度提高達 5%。

技巧 2:正確填充吸頭
當某一吸頭的建議(標稱)范圍為zui大吸頭容量(標稱容量)的 10% 至 100% 時,可在 35% 至 100% 這一較小以及優(yōu)化的范圍內(nèi)實現(xiàn)zui高度。
在如此小的范圍內(nèi)移液會減少對操作人員技法的要求,并可將結果準確度提高約 1%。
當達到標稱容量的 50% 時可提供*結果。

技巧 3:吸液時保持垂直入水角
使入水角盡可能地接近垂直位置 – 否則垂直液柱較小,這樣將會吸入過多樣品。
(分液時,吸頭應當與容器壁保持較小角度,從而確保良好的排液效果。關于分液的更多技巧將在下一期電子快訊中提供)
使用垂直位置(尤其是使用微量移液器時),可使準確度提高達 2%。

技巧 4:一致性千分尺設置
始終從同一方向設置您的千分尺。
從高至低進行:
在將容量設置從高容量減少降至低容量時,只需將表盤下調(diào)至所需容量設置。
提高容量設置時,轉(zhuǎn)動選擇輪使其略微超過所需容量,然后緩慢回調(diào)至正確設置。這可避免機械回沖。
正確設置容量可使準確度提高達 0.5%。

技巧 5:吸頭入水深度
正確的吸頭入水深度對于微量移液器尤為重要。如果吸頭入水過深,則隨著壓力的加大,吸液量將會增多。保留在吸頭表面的液體會影響結果。如果吸頭未入水過深,則會造成空氣進入,從而產(chǎn)生氣泡以及導致容量不準確。正確的入水深度可使準確度提高達 5%。

 

 移液器容量  入水深度
 2 與 10ul  1mm
 20 與 100ul  2-3mm
 200 與 1000ul  3-6mm
 5000ul 與 10ML  6-10mm

 

技巧 6:分液技法
對于大多數(shù)應用而言,建議在分液時將吸頭的末端貼靠容器壁。這可減少或者消除分液后殘留在吸頭上的樣品。沿側(cè)壁向上滑動吸頭末端將移液器拆下,從而去除吸頭孔處的任何殘留液滴。此技法可使結果準確度提高達 1%。

另一種技法是直接分液到液體表面。使用諸如 RAININ FinePoint 吸頭之類的薄壁吸頭十分重要,這是因為這些吸頭允許充分排液。

如果直接分液至液體中,則建議進行反向模式移液,從而防止分液后吸液。

技巧 7:預清洗
移液前至少預清洗兩遍,從而補償位于吸頭內(nèi)部的液體。這還有助于中和毛細管效果以及使移液器內(nèi)部的空氣溫度等于樣品溫度。
使用正在分液的相同液體進行預清洗。
使用吸頭吸液,然后將其重新分液至儲罐或者廢液箱
預清洗可為所有等分溶液提供相同的接觸表面
當與水液一同使用時,兩次預先沖洗可使準確度提高達 0.2%

技巧 8:預清洗異常處理
盡管預清洗在大多數(shù)情況下可提高準確性,但是當對非常溫和或者冰冷的溶液進行移液時,它會對結果產(chǎn)生不利影響。

不建議進行預清洗的例外情況為:
- 對非常冰冷的溶液(如:冰?。┻M行移液
- 對 37°C 或以上的溫和溶液進行移液

對溫和或者冰冷溶液進行預清洗有可能造成高達 5% 的錯誤率。

技巧 9:恒定室溫
在恒定室溫條件下移液。移液的理想室溫為 +- 21.5°C,此溫度同樣適用于校準。防止溫度大幅度或者突然變化,這是因為移液器中的空氣無法足夠快速地適應,以及樣品量可能會受到影響。在恒溫條件下移液可使準確度提高達 5%。

技巧 10:始終垂直存放移液器
不要將移液器平放在抽屜內(nèi)或者工作臺上。這有可能損壞套柄末端,從而造成泄漏。此外,殘留液體還會流入套柄中,從而污染移液器。正確儲存移液器可防止不可估量的錯誤以及保護儀器。

技巧 11:吸頭入水時間
在將樣品吸入吸頭時,在樣品中的入水時間是良好移液技法中的關鍵因素。在平穩(wěn)松開定位銷按鈕之后,必須進行短暫暫停,然后再從樣品中取出,以確保將全量樣品吸入吸頭中。如果量較大以及對于粘性物質(zhì)而言,必須在等候較長時間后再取出,因為移液器中的氣室需要一秒鐘的時間才能實現(xiàn)均衡。

技巧 12:吸液速率
移液器的吸液速率不盡相同,因此會對結果的精度與準確度產(chǎn)生影響。用戶應使用以一種平穩(wěn)并且受控的方式釋放移液器定位銷按鈕。釋放過快的定位銷可能出現(xiàn)的zui常見后果是:氣霧會進入移液器套柄中,從而損壞移液器的內(nèi)部部件。當出現(xiàn)向上噴濺液體的情況時,這種現(xiàn)象更為明顯。如果液體具有腐蝕性,則有可能損壞移液器的套柄并且會造成樣品交叉污染。

技巧 13:反向移液模式
對于科研人員而言,使用移液器對粘性與密致液體進行吸液與分液一直是一道難題。對策是使用反向移液模式。進行樣品吸液時,將定位銷下按至“排液”。將所選液量和多余液體吸入吸液器吸頭中。然后在分液時,將定位銷只按至零位。通過此方法,在分液時液體會保持在吸頭內(nèi)。對于生物、粘性或起泡液體而言,反向移液可改進結果。

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