上海滬宇生物科技有限公司作者
細菌培養(yǎng)基:
牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基
牛肉膏0.3g ,蛋白胨1.0g,氯化鈉0.5g,瓊脂 1.5g,水 100ml
在燒杯內(nèi)加水100毫升,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號后,放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂*溶解后補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2~7.6,分裝在各個試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌:1.05千克每平方厘米、121攝氏度維持15~30分鐘。
馬鈴薯培養(yǎng)基
取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細細剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在
燒杯上做好記號,煮沸,轉(zhuǎn)用文火燉2小時。過濾,濾出的肉末干燥處理,濾液pH值調(diào)到7.5左右。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,備用。
根瘤菌培養(yǎng)基
葡萄糖10g *0.5g 碳酸鈣3g *0.2g 酵母粉0.4g 瓊脂20g 水1000ml 1%結(jié)晶紫溶液1ml
先把瓊脂加水煮沸溶解,然后分別加入其他組分,攪拌使溶解后,分裝,滅菌,備用。
放線菌培養(yǎng)基:
淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基(高氏一號培養(yǎng)基)
可溶性淀粉 2.0g 硝酸鉀0.1g *0.05g 氯化鈉0.05g *0.05g *0.001g 瓊脂2g 水100ml
先把淀粉放在燒杯里,用5毫升水調(diào)成糊狀后,倒入95毫升水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂*溶解后,補足失水。調(diào)整pH值到7.2~7.4,分裝后滅菌,備用。
面粉瓊脂培養(yǎng)基
面粉60g 瓊脂20g 水1000ml
把面粉用水調(diào)成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調(diào)勻,補充水分,調(diào)整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。
微藻培養(yǎng)基:
BG-11培養(yǎng)基
NaNO3 1.5g K2HPO4 ·3H2O 0.04g MgSO4·7H2O 0.075g CaCl2 ·2H2O 0.036g Citric Acid (檸檬酸 )0.006g Ferric ammonium citrate(檸檬酸鐵銨)0.006g EDTA (dinatrium-salt) 0.001g Na2CO3 0.02g A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸餾水)919ml
SE培養(yǎng)基
NaNO3 | 0.25g |
K2HPO4 . 3H2O | 0.075g |
MgSO4 . 7H2O | 0.075g |
CaCl2 . 2H2O | 0.025g |
KH2PO4 | 0.175g |
NaCl | 0.025 |
Soil extract | 40ml |
FeCl3·6H2O | 0.005 |
Fe—EDTA | 1ml |
A5 solution 1000× | 1ml |
distilled water | 958ml |
取花園土未施過肥0。5kg置于燒杯或三角瓶中,加入蒸餾水1000毫升,瓶口用透氣塞封口,在水浴中沸水加熱2小時,冷卻數(shù)小時,在無菌條件下過濾,取上清液,將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000毫升。土壤提取液保存在4ºC備用。
Composition of the A5 solution
Add to 100 ml of distilled water:
H3BO3 | 286 mg |
MnCl2 . 4H2O | 181 mg |
ZnSO4 . 7H2O | 22 mg |
CuSO4 . 5 H2O | 7.9 mg |
(NH4)6Mo7O24 .4H2O | 3.9 mg |
將EDTA和FeCl3·6H2O分別溶于水和HCl(0.1N),混勻即可。
Na2EDTA | 1g |
distilled water | 50ml |
FeCl3·6H2O | 81 mg |
HCl(0.1N) | 50ml |
Preparation: to 997 mL of glass-distilled water, add 1.0 g proteose peptone, 15.0 g agar, and the following stock solutions:
working solution | g/1000 mL H2O |
NaNO3 | 0.25 |
CaCl2. 2H2O | 0.025 |
MgSO4. 7H2O | 0.075 |
K2HPO4 | 0.075 |
KH2PO4 | 0.175 |
NaCl | 0.025 |
A5 solution | 1ml |
EDTA-Fe | 1ml |
FeCl3 (0.05%) | 1ml |
真菌培養(yǎng)基:
薩市(Sabouraud’s)培養(yǎng)基
蛋白胨 10g 瓊脂20g 麥芽糖 40g 水1000ml
先把蛋白胨、瓊脂加水后,加熱,不斷攪拌,待瓊脂溶解后,加入40g麥芽糖(或葡萄糖),攪拌,使它溶解,然后分裝,滅菌,備用。
本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類真菌所常用的。
馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基
把馬鈴薯洗凈去皮,取200g切成小塊,加水1000ml,煮沸半小時后,補足水分。在濾液中加入10g瓊脂,煮沸溶解后加糖20g(用于培養(yǎng)霉菌的加入蔗糖,用于培養(yǎng)酵母菌的加入葡萄糖),補足水分,分裝,滅菌,備用。
把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖還可用來培養(yǎng)放線菌和芽孢桿菌。
豆芽汁培養(yǎng)基
黃豆芽100g 瓊脂15 g 葡萄糖20g 水1000ml
洗凈黃豆芽,加水煮沸30分鐘。用紗布過濾,濾液中加入瓊脂,加熱溶解后放入糖,攪拌使它溶解,補足水分到1000ml,分裝,滅菌,備用。
把這培養(yǎng)基的pH值調(diào)到7.2~7.4,可用來培養(yǎng)細菌和放線菌。
豌豆瓊脂培養(yǎng)基
豌豆 80粒瓊脂 5g 水200ml
取80粒干豌豆加水,煮沸1小時,用紗布過濾后,在濾液中加入瓊脂,煮沸到溶解,分裝,滅菌,備用。
食用菌菌種培養(yǎng)基:
馬鈴薯-蔗糖-瓊脂培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁 1000ml 蔗糖20g 瓊脂18g
把馬鈴薯洗凈去皮后,切成小塊。稱取馬鈴薯小塊200g,加水1000ml,煮沸20分鐘后,過濾。在濾汁中補足水分到1000ml,即成20%馬鈴薯煮汁。在馬鈴薯煮汁中加入瓊脂和蔗糖,煮沸,使它溶解后,補足水分,分裝,滅菌,備用。使用該培養(yǎng)基對pH值要求不嚴格,可以不測定。
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基
20%馬鈴薯煮汁1000 ml 磷酸二氫鉀3g *1.5g 葡萄糖20g 維生素10mg 瓊脂18g
先配制20%馬鈴薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各種組分,加熱溶解后補足水分,調(diào)整pH值到6。分裝,滅菌,備用。 該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。
煙草的培養(yǎng)基:
在植物組織培養(yǎng)時,通過調(diào)節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽
CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化
愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基制備
以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ),向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL ,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,*200×母液10mL,配制得MS培養(yǎng)基后,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入實際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0.加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂*溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。
煙草葉片愈傷組織誘導(dǎo)
取一無菌培養(yǎng)皿,用*切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養(yǎng)皿中,并用*將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上,每瓶接種5小片,一共接種6瓶。接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周,然后在同樣溫度下有光照和全黑暗下培養(yǎng)3周直至愈傷組織形成(兩種情況各置3瓶).觀察愈傷組織誘導(dǎo)結(jié)果,統(tǒng)計愈傷組織誘導(dǎo)率。
器官分化及植株再生培養(yǎng)
將誘導(dǎo)的愈傷組織按類型分別轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上,置于連續(xù)光照,溫度20-22 C條件下培養(yǎng)3周,統(tǒng)計愈傷組織再生植株情況.
愈傷組織誘導(dǎo)的總體情況
煙草愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)4周后,愈傷組織基本形成,即排除因生長時間不夠而未形成愈傷的情況。具體情況見表一中所示,6瓶培養(yǎng)物均有愈傷形成,且都未發(fā)生污染,但誘導(dǎo)率幾乎各不相同.其中, 在光照條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為60.0℅, 在黑暗條件下培養(yǎng)的3瓶平均愈傷誘導(dǎo)率為46.7%.由于實驗過程中,外植體即煙草葉片取得偏小,接種時可能已有部分外植體的大部分細胞脫水死亡,使整個實驗的愈傷組織誘導(dǎo)率偏低,愈傷塊偏小。
動物細胞培養(yǎng)基:
RPMI1640培養(yǎng)基是一個全營養(yǎng)型培養(yǎng)基,廣泛應(yīng)用于哺乳動物細胞和雜交瘤細胞的培養(yǎng),如人骨髓瘤細胞、鼠雜交瘤細胞、人白細胞以及B細胞和T細胞。zui初設(shè)計用于懸浮細胞培養(yǎng)和人白血病細胞的單層細胞培養(yǎng)。
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