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人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒使用說(shuō)明書
資料類型 | jpg文件 | 資料大小 | 65536 |
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關(guān) 鍵 詞 | 人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒,elisa試劑盒 |
- 【資料簡(jiǎn)介】
人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒工作原理
本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定樣品中人8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)的水平。向預(yù)先包被了人8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG),溫育;溫育后,加入標(biāo)記的抗8-OHDG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中人8羥基脫氧鳥苷(8-OHDG)的濃度呈正相關(guān)。
需要而未提供的試劑和器材
37℃恒溫箱。
標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
精密移液器及一次性吸頭
蒸餾水,
一次性試管
吸水紙
注意事項(xiàng)
從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。
嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
標(biāo)本要求
.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒操作程序
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶請(qǐng)按照說(shuō)明自行在小試管中倍比稀釋):
64ng/ml
(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
20μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入20μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
32ng/ml
(4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
20μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入20μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6ng/ml
(3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
20μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入20μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
8ng/ml
(2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
20μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入20μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4ng/ml
(號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)
20μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入20μl的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加樣:)空白孔:空白對(duì)照孔不加樣品,標(biāo)記的抗8-OHDG抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,-HRP50μl(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好抗體,故不加);3)待測(cè)樣品孔:加入樣本40μl,然后各加入抗- 8-OHDG抗體0μl、鏈酶親和素-HRP50μl,蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色0分鐘。
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后0分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
9.人8羥基脫氧鳥苷elisa試劑盒根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。
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