-酮基睪酮酶聯(lián)免疫分析人ELISA試劑盒實驗原理

【資料簡介】

-酮基睪酮酶聯(lián)免疫分析人ELISA試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人 -酮基睪酮（kT）水平。用純化的人 -
酮基睪酮（kT）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 -酮基
睪酮（kT），再與 HRP 標記的 -酮基睪酮（kT）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體
復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸
的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 -酮基睪酮（kT）呈正相關。用酶
標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人 -酮基睪酮（kT）
濃度。
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然后再加待測樣品 0µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.
溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.
配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6.
加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.
溫育：操作同 3。
8.
洗滌：操作同 5。
9.
顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
0 分鐘.
0. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 5 分鐘以內進行。
-酮基睪酮酶聯(lián)免疫分析人ELISA試劑盒操作程序總結：
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 5-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．-酮基睪酮酶聯(lián)免疫分析人ELISA試劑盒本試劑不同批號組分不得混用。