魚5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒實驗原理

【資料簡介】

魚5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 5-吡咯啉（P5CRs）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中魚 5-吡咯啉（P5CRs）（P5CRs）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中（P5CRs），再與 HRP標(biāo)記的  5-吡咯啉          （P5CRs）。用純化的魚 5-吡咯啉依次加入 5-吡咯啉抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物  TMB 顯色。TMB  在HRP  酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-吡咯啉          （P5CRs）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中魚 5-吡咯啉（P5CRs）濃度。
魚5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟
.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 0μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色5分鐘.
0.終止：每孔加終止液    50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 5分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
魚5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項
．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 5-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本  OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
0.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
魚5-吡咯啉酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期
．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月