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免疫金銀染色法
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關(guān) 鍵 詞 | 實驗,生物學(xué),生物實驗,染色 |
- 【資料簡介】
1、實驗原理
彩色免疫金銀染色法是抗原位點處生成的銀顆粒經(jīng)鐵氰化鉀與*的作用被氧化成溴化銀,后者與彩色顯影劑反應(yīng)被還原成金屬銀,而彩色顯影劑本身則被氧化,其氧化產(chǎn)物使彩色還原劑由無色變?yōu)橛猩娜玖喜⒊练e在銀顆粒部位,金屬銀變成銀離子。
2、試劑及材料
Lugol’s碘液,含5%*和1%亞硫酸鈉溶液,2%鐵氰化鉀和1%*溶液。
3、操作方法
(1)石蠟切片常規(guī)脫蠟水合(細(xì)胞甩片、爬片或冰凍切片固定后用TBS洗);
(2)依次與0.1%*,37℃,消化30min;Lugol’s碘液5min;5%*1min;TBS洗5min;
(1)加1%的卵蛋白,室溫15min ,TBS洗5min;加適當(dāng)稀釋的一抗,置濕盒內(nèi),4℃過夜;
(2)TBS洗三次,每次5min,加1%的卵蛋白,室溫15min;
(3)TBS洗5min,加適當(dāng)稀釋的膠體金標(biāo)記的二抗,置濕盒內(nèi),4℃過夜;
(4)TBS洗三次,每次5min,再用蒸餾水洗后,將切片放入*顯色液,避光顯色5-10min;
(5)用蒸餾水沖洗,2%鐵氰化鉀和1%*作用1min;
(6)用蒸餾水沖洗,彩色顯色液顯影;
(7)用蒸餾水沖洗,依次與2%鐵氰化鉀和1%*作用1min;5%*和1%亞硫酸鈉作用5min,自來水沖洗,緩沖甘油封片;
4、結(jié)果觀察
鏡檢,抗原抗體反應(yīng)處呈蘭色(a-萘酚)或綠色(菲尼酮)。
原文地址:/biotech/Immunity/2011/v81644278
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