一抗和二抗的實驗選擇

【資料簡介】

一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于 WB IHC ICC ELASA 分析等，如果抗體說明書沒有提及的應(yīng)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類型，而僅是說明尚未經(jīng)過此種分析試驗驗證，如果抗體不適用某些分析試驗，則會在抗體說明書上標注出來不適于某分析試驗。

根據(jù)一抗種屬及類型選擇合適的二抗廣義上是指專門和進行特異性反應(yīng)和結(jié)合的抗體，在免疫學反應(yīng)中，經(jīng)常需要針對試驗選擇不同的二抗，我們能為您的科研工作提供適合和全面的二抗產(chǎn)品。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，同時在后繼試驗中也會有不同的檢測方案，因此在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求，一般來說，選擇合適的二抗需要從下面幾個方面考慮：

 

【一抗的種屬來源】 二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來源，例如：如果你的一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是從兔血清里制備的兔源多克隆抗體，則相應(yīng)的二抗需要選擇抗兔的二抗。即根據(jù)一抗的物種來源選擇相應(yīng)的抗該物種的二抗。

 

【一抗的類別亞型】 二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是 IgG 類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗 IgG 抗體。其中單克隆抗體的類別及亞類通常會在產(chǎn)品說明書中都會有描述，如果你的一抗是小鼠 IgM，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當是抗小鼠 IgM。如果單克隆一抗是小鼠 IgG 的某一亞類（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3），那么幾乎所有的抗小鼠 IgG 都可以與之結(jié)合，或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠 IgG1，那么你可以選擇抗 IgG1 的二抗，此種抗體在雙標記實驗中尤其適合。在不清楚一抗為何種類/亞類的情況下，可以選用抗相應(yīng)物種 IgG。

 

【二抗的種屬來源】 一般來說，不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的lian系，來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實驗里沒有太多的差別。然而在一些特殊的實驗里，如雙標實驗里，如果其中一個一抗是山羊來源的，一個是小鼠來源的，則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的二抗，這時候，二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。 有相應(yīng)的驢來源的二抗，非常適合做類似雙標的免疫實驗。

 

【二抗的耦聯(lián)標記】 一般來講，耦聯(lián)到二抗上的我們探針主要有酶（辣根過氧化酶 HRP 和堿性酶 AP 或其衍生物 APAAP，PAP），熒光基團（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight 等）、生物素、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于 Western Blot 和 ELISA，常用的二抗是酶標二抗；而細胞或組織標記實驗（細胞免疫化學，組織免疫化學，流式細胞術(shù)）中通常使用熒光基團標記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性酶標記的二抗。如果想要更大程度的放大檢測信號，可以使用 Biotin/Avidin 檢測系統(tǒng)。在一些熒光檢測方案中，則需要選擇不同的熒光標記；而金顆粒標記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。

 

【是否經(jīng)過血清吸附過的二抗】如您的檢測樣本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的單克隆抗體，二抗就需要選擇抗小鼠源的二抗，如果您對實驗的特異性要求很高，那我們向您推薦經(jīng)過人血清吸附過的抗小鼠源的二抗，這種二抗由于經(jīng)過人血清吸附而排除了與人源組織（如 IgG 等）可能發(fā)生非特異性反應(yīng)的 IgG，因此將非特異性結(jié)合降低到低。