彩色免疫金銀染色方法

【資料簡(jiǎn)介】

彩色免疫金銀染色方法（coloured IGSS,CIGSS）是由Frite和Hoenes等（1986）建立的一種新方法，劉彥仿等（1988）在《中華病理學(xué)雜志》上也報(bào)道了改進(jìn)后的CIGSS方法。其基本原理是在IGSS法的基礎(chǔ)上，根據(jù)洗彩色照片的顯影原理而發(fā)展起來(lái)的，即IGSS后，在抗原位點(diǎn)處生成的銀顆粒經(jīng)鐵氰化鉀與*的氧化反應(yīng)，將銀顆粒氧化成溴化銀，后者與彩色顯影劑起還原反應(yīng)，生成金屬銀，而彩色顯影劑本身則被氧化，其氧化產(chǎn)物使彩色成色劑由五色變成有色的染料，并沉積在銀顆粒的部位，金屬銀變成了銀離子。由于染料只能通過(guò)彩色顯影劑沉積在有銀的部位，不會(huì)發(fā)生非特異性背景染色。

一、操作步驟
（1）石蠟切片常規(guī)脫蠟至水。
（2）0.1%*37℃消化20min,或抗原修復(fù)20min（98℃），自然冷卻至室溫。
（3）0.05mol/L（pH7,4）TBS洗3×3min.
（4）1%EA（卵蛋白）15min,不洗。
（5）適當(dāng)稀釋的特異抗體室溫4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.
（6）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×5min.
（7）0.02mol/L（pH7.4）TBS（內(nèi)含0.1%BSA）洗10min.
（8）1%EA 15min,不洗，1:10-1:20稀釋的PAGlonm室溫孵育1h,或37℃孵育30min.
（9）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗10min.
（10）1%戊二醛洗10min.
（11）雙蒸水洗5min.
（12）l%明膠洗5min.
（13）銀避光顯影（見(jiàn)銀顯影劑配方）8~15min
（14）雙蒸水洗15min.
（15）固定：用顯影定影液（1;4或1:10）固定5min,也可以用15%硫酸鈉-20%*混合液固定1-3min,或用1%戊二醛固定5rain，溫水洗3~6min.
（16）漂白：用2%鐵氰化鉀和1%*洗10min,雙重蒸餾水洗5rain.
（17）彩色顯影：用。-萘酚或菲尼酮或堿性品紅顯色2-4min,雙重蒸餾水洗5~10min.
（18）固定：2%*和1%亞硫酸鈉洗Stain.
（19）流水沖洗。
（20）緩沖甘油封片，觀察。

二、CIGSS的優(yōu)點(diǎn)
（1）陽(yáng)性結(jié)果比黑色更鮮明。
（2）可以使弱信號(hào)得到進(jìn)一步放大。
（3）可部分消除IGSS背景染色。
（4）信號(hào)/背景比值高。
（5）是開(kāi)展IHC雙重或多重標(biāo)記的新途徑。

原文地址:/biotech/Immunity/colloidalgold/2009/p820464783