大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）試劑盒使用說明書

【資料簡介】

          大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）試劑盒使用說明書

 

 

本試劑盒僅供研究使用。 

 

 

 

檢測范圍：6.0 pg/ml - 160pg/ml 

 

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中α氨基丁酸受體（α-ABAR）含

量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）水平。用純

化的大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微

孔中依次加入α氨基丁酸受體（α-ABAR），再與 HRP 標記的α氨基丁酸受體（α-ABAR）

抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在

HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的

α氨基丁酸受體（α-ABAR）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），

通過標準曲線計算樣品中大鼠α氨基丁酸受體（α-ABAR）濃度。

試劑盒組成

 

1 30 倍濃縮洗滌液

 

20ml×1 瓶

 

7 終止液

 

6ml×1 瓶

 

2 酶標試劑

 

6ml×1 瓶

 

8 標準品（320pg/ml） 0.5ml×1 瓶

 

3 酶標包被板

4 樣品稀釋液

5 顯色劑 A 液

6 顯色劑 B 液

標本要求

 

12 孔×8 條

6ml×1 瓶

6ml×1 瓶

6ml×1/瓶

 

9 標準品稀釋液

10 說明書

11 封板膜

12 密封袋

 

1.5ml×1 瓶

1 份

2 張

1 個

 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

 

160pg/ml 

80pg/ml 

40pg/ml 

20pg/ml 

10pg/ml 

 

5 號標準品

4 號標準品

3 號標準品

2 號標準品

1 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

 

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，

然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結(jié)：計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度。