禽呼腸孤病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 使用說(shuō)明書(shū).

【資料簡(jiǎn)介】

【產(chǎn)品名稱(chēng)】

通用名：禽呼腸孤病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Avian reovirus,ARV (ELISA)

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒

【預(yù)期用途】禽呼腸孤病毒是由呼腸孤病毒(Avian reovirus,ARV)引起雞多種疾病，包括病毒性關(guān)節(jié)炎、矮小綜合征、呼吸道疾病、腸道疾病和所謂吸收不良綜合征，是一種傳染性疾病。本病呈世界性分布，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的最主要疫病之一。疫苗免疫是預(yù)防和控制禽呼腸孤病毒發(fā)生的*途徑，而免疫后抗體水平的高低反映實(shí)際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對(duì)禽呼腸孤病毒的抵抗力。

    本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測(cè)，以確定被檢雞是否感染禽呼腸孤病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平；評(píng)估雞群感染ARV的風(fēng)險(xiǎn)程度，為ARV免疫程序的制定提供參考。

【原理】

本試劑盒由預(yù)包被禽呼腸孤病毒重組蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用間接酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)雞血清或血漿中雞傳染性喉氣管炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢血清，再加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)溫育后，若樣品中含有禽呼腸孤病毒的抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原抗體結(jié)合，經(jīng)*洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；在孔中加底物液TMB，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有禽呼腸孤病毒抗體。

【試劑盒組成】

序號(hào)	名稱(chēng)	規(guī)格/96T×1
1	微孔酶標(biāo)板	96孔
2	陰性對(duì)照	0.3mL
3	陽(yáng)性對(duì)照	0.3mL
4	樣本稀釋液	6mL
5	檢測(cè)抗體-HRP	10mL
6	20×洗滌緩沖液	25mL
7	底物A	6mL
8	底物B	6mL
9	終止液	6mL
10	封板膜	2張
11	說(shuō)明書(shū)	1份
12	自封袋	1個(gè)
13	微孔酶標(biāo)板	96孔

 

【儲(chǔ)存及有效期】 2～8℃保存，有效期6個(gè)月。

包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。

2. 20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1：20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水.

 

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl；樣品孔每孔加入待測(cè)樣本50μL，空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，靜置，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.甩去孔內(nèi)液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μL，蓋好蓋板膜，置37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔吸光值（A值），無(wú)參比波長(zhǎng)用空白孔調(diào)零(即所有孔吸光值減去空白孔吸光值)。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照≤0.2，陽(yáng)性對(duì)照≥0.8。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1.C.O（臨界值）=0.25+陰性對(duì)照孔均值。

2.陽(yáng)性判斷（Cut-Off值）：陰性對(duì)照OD值+0.25，樣本OD值大于閾值，判定為陽(yáng)性，反之，為陰性。。

【試驗(yàn)方法的局限性】

該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)雞血清或血漿中禽呼腸孤病毒抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。

【注意事項(xiàng)】

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。

3.底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

4.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋，以防水滴凝聚在冷板條上。未用完酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

5.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果，在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。

6.洗滌時(shí)各孔均需加滿(mǎn)液體，防止孔口有游離酶不能洗凈，消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

7.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。

8.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

9.不同批號(hào)試劑組分不得混用。