小鼠白細胞介素-6（IL-6）試劑盒說明

【資料簡介】

 

小鼠白細胞介素-6（IL-6）酶聯(lián)免疫分析

 

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                           96T

3pg/ml-120pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素 -6（IL-6）含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白細胞介素 -6（IL-6）水平。用純化的小鼠白細胞介素-6（IL-6）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-6（IL-6），再與 HRP標記的白細胞介素 -6（IL-6）抗體結(jié)合，形成抗體 -抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素 -6（IL-6）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度（ OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠白細胞介素 -6（IL-6）濃度。

試劑盒組成

1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（240pg/ml） 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑 A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑 B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標本要求

1           標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于 -20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2           NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（ HRP）活性。

 

操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 3 0分鐘。

4.配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零， 450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。

 

120pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液 60pg/ml 4號標準品 150μl的 5號標準品加入 150μl標準品稀釋液 30pg/ml 3號標準品 150μl的 4號標準品加入 150μl標準品稀釋液 15pg/ml 2號標準品 150μl的 3號標準品加入 150μl標準品稀釋液 7.5pg/ml 1號標準品 150μl的 2號標準品加入 150μl標準品稀釋液

操作程序總結(jié)：

計算

以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值大于標準品孔*孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準 .

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期： 6個月