通用型LAMP試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

 1.        在冰上溶解除酶外的各種組份，混勻，稍離心。在反應(yīng)管中加入以下組份：

成份	樣品管	陰性對(duì)照
LAMP Mix（2×）	10 uL	10 uL
FIP引物終濃度	0.8 uM	0.8 uM
BIP引物終濃度	0.8 uM	0.8 uM
F3引物終濃度	0.2 uM	0.2 uM
B3引物終濃度	0.2 uM	0.2 uM
Loop F引物終濃度（可選項(xiàng)）	0.4 uM	0.4 uM
Loop B引物終濃度（可選項(xiàng)）	0.4 uM	0.4 uM
MgCl2（25 mM）	3 uL	3 uL
模板DNA	1-100ng	不加
Bst DNA聚合酶（8U/uL）	1.5 uL	1.5 uL
補(bǔ)水到	20 uL	20 uL

注：如在反應(yīng)管中加入本公司PCR級(jí)綠如藍(lán)染料1uL（水則少加1 uL），則可直接在熒光定量PCR儀中進(jìn)行熒光定量檢測(cè)。

2.       混勻，置于60-65℃保溫30-120分鐘。注意：如果不使用Loop引物，則保溫2小時(shí)；如果使用Loop引物，則保溫30分鐘。

3.       80℃10分鐘滅活Bst DNA聚合酶。

4.       產(chǎn)物置于-20℃備用或立即用于下游檢測(cè)。擴(kuò)增產(chǎn)物可選下列方法之一檢測(cè):

1）        瓊脂糖凝膠電泳。取擴(kuò)增產(chǎn)物5 uL，1-2%的瓊脂糖凝膠電泳，可見(jiàn)LAMP特征性電泳圖譜；

2）        向擴(kuò)增產(chǎn)物中直接加入本公司PCR級(jí)綠如藍(lán)染料（另售）1 uL，混勻，稍離心。將反應(yīng)管置于紫外透射儀或凝膠成像系統(tǒng)中，紫外燈下可見(jiàn)綠色熒光產(chǎn)生；

3）        熒光定量檢測(cè)。

5.       結(jié)果分析：

1）        如果沒(méi)有擴(kuò)增，則需要用本試劑提供的陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行擴(kuò)增。本試劑盒提供5次陽(yáng)性對(duì)照，反應(yīng)按下表設(shè)置：

成份	陰性對(duì)照管	陽(yáng)性對(duì)照管
LAMP Mix（2×）	10 uL	10 uL
對(duì)照引物混合物	4.0 uL	4.0 uL
對(duì)照模板DNA	不加	1 uL
MgCl2（25 mM）	3 uL	3 uL
Bst DNA聚合酶（8U/uL）	1.5 uL	1.5 uL
水	1.5 uL	0.5 uL

混勻后，置于60℃保溫120分鐘，其余操作同上。注意：本對(duì)照引物中沒(méi)有Loop引物，所以保溫2小時(shí)。

如果陽(yáng)性對(duì)照能夠擴(kuò)增出，則說(shuō)明試劑盒沒(méi)有問(wèn)題，可能是模板或引物的問(wèn)題。如果陽(yáng)性對(duì)照沒(méi)有擴(kuò)增出條帶，則是試劑盒的問(wèn)題，請(qǐng)跟廠家。