人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒實驗原理

【資料簡介】

人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：人皰疹病毒 8 型 PCR 試劑盒

Name ：Human Herpesvirus-8 (HHV-8) PCR Kit

【包裝規(guī)格】50 次/盒

【產(chǎn)品及特點】

人皰疹病毒 8 型(Human Herpesvirus-8,HHV-8)是從淋巴增生性疾

病和艾滋病患者淋巴細(xì)胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒，可通過唾液飛沫及密

切接觸（如接吻，共用餐、飲器具等）、輸血傳播。除免疫低

下（如先天性免疫缺陷、艾滋病、長期服用免疫抑制劑等）外，絕大多數(shù)

人感染后終身都不會產(chǎn)生明顯癥狀；免疫低下者，如 HIV 感染者，當(dāng)人

體特異性免疫被削弱至一定程度時， 潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感

染癥狀，此時會出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥

狀，活化的病毒可大規(guī)模感染 T 淋巴細(xì)胞，使免疫功能進(jìn)一步削弱，該

病毒對人體健康有較大影響，因此檢測人皰疹病毒 8型 DNA 具有重要意

義。本產(chǎn)品就是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的、檢測此病毒的試劑盒。本產(chǎn)品具

有下列特點：

1.即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。

2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增人皰疹病毒8 型病毒 DNA，與

其他病毒沒有交叉反應(yīng)。

3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4.PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5.本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

【規(guī)格及成分】

成 份 編號 十孔盒包裝

PCR MagicMix 3.0 63981 1 mL（紅蓋）

超純水 109350 1 mL（亮黃色）

人皰疹病毒 8型 PCR 引物混合液 3026yw 100 μL（白蓋）

人皰疹病毒 8 型 PCR 陽性對照

（1×10E8 拷貝/μL）

93981-3026pc 50 μL（黃蓋）

【運(yùn)輸及保存】

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。人皰疹病毒 8 型 PCR 陽性對

照需要單獨放置，不要污染其他試劑。

【自備試劑】

樣品 DNA。

【使用方法】

一、樣品 DNA 的制備

用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA

提取試劑盒兼容。

2.如果有 N 個樣品，則需做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和

一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是人皰疹病毒8 型 PCR 陽性

對照的 1000 倍稀釋液，其總體積等于試劑盒所需的樣品量，樣品制備陰

性對照是直接用水。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）

3.對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰

性對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成

分：

成分

N+2 個

樣品管

PCR 陰性

對照

PCR 陽性

對照

PCR Magic Mix 3.0 各 20 μL 20 μL 20 μL

人皰疹病毒 8 型通用 PCR 引物混

合液

各 2 μL 2 μL 2 μL

N+2 個樣品 DNA 模板 各 18 μL - -

PCR 陰性對照（水） - 18 μL -

PCR 陽性對照（人皰疹病毒 6 型通

用 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋

液）

- - 18 μL

4.按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng): 過程 溫度 時間

預(yù)變性 95℃ 5 min

PCR 反應(yīng)

（35 個循環(huán)）

95℃ 15 sec

55℃ 15 sec

82℃ 30 sec 最后延伸 82℃ 10 min 三、電泳檢測

5.取 5μL PCR 產(chǎn)物電泳進(jìn)行檢測。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束

后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長

度為 481bp。陽性對照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否

則實驗無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增

以排除 PCR 抑制劑的感染。