大鼠8異前列腺素F2α（8-ISO-PGF2Α）酶聯(lián)免疫檢測

【資料簡介】

 大鼠8異前列腺素F2α（8-ISO-PGF2Α）酶聯(lián)免疫檢測

試劑盒使用說明書

 

使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于生物素雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠8異前列腺素F2α（8-ISO-PGF2Α）），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

 

用    途： 用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中8異前列腺素F2α（8-ISO-PGF2Α）的測定。

工作原理

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠8異前列腺素F2α（8-ISO-PGF2Α）的水平。向預(yù)先包被了大鼠8異前列腺素F2α（8-ISO-PGF2Α）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入8異前列腺素F2α（8-ISO-PGF2Α），溫育；溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗8-ISO-PGF2Α抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠8異前列腺素F2α（8-ISO-PGF2Α）的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成

1	標(biāo)準品（800pg/ml）	0.5ml	7	顯色劑A液	6ml
2	標(biāo)準品稀釋液	3ml	8	顯色劑B液	6ml
3	酶標(biāo)包被板	12孔×8條	9	終止液	6ml
4	鏈霉親和素-HRP	6ml	10	說明書	1份
5	30倍濃縮洗滌液	20ml	11	封板膜	2張
6	生物素標(biāo)記的抗- 8-ISO-PGF2Α抗體	1ml	12	密封袋	1個

需要而未提供的試劑和器材

1．   37℃恒溫箱。

2．   標(biāo)準規(guī)格酶標(biāo)儀。

3．   精密移液器及一次性吸頭

4．   蒸餾水，

5．   一次性試管

6．   吸水紙

注意事項

1．   從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．   各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。

3．   嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準。

4．   為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

5．   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

6．   底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

 

標(biāo)本要求

1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作程序

1．   標(biāo)準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：

400pg/ml	（5號標(biāo)準品）	120μl的原倍標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液
200pg/ml	（4號標(biāo)準品）	120μl的5號標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液
100pg/ml	（3號標(biāo)準品）	120μl的4號標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液
50pg/ml	（2號標(biāo)準品）	120μl的3號標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液
25pg/ml	（1號標(biāo)準品）	120μl的2號標(biāo)準品加入120μl的標(biāo)準品稀釋液

2．   根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。

3．   加樣：1）空白孔：空白對照孔不加樣品，生物素標(biāo)記的抗8-ISO-PGF2Α抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標(biāo)準品孔：加入標(biāo)準品50μl，鏈霉素-HRP50μl（標(biāo)準品中已事先整合好生物素抗體，故不加）；3）待測樣品孔:加入樣本40μl，然后各加入抗- 8-ISO-PGF2Α抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。

4．   配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5．   洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6．   顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。

7．   終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

8．   測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。

9.根據(jù)標(biāo)準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。

操作程序總結(jié)：

準備試劑，樣品和標(biāo)準品

 

 

加入準備好的樣品和標(biāo)準品，生物素標(biāo)記二抗和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘

 

洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色10分鐘

 

加入終止液

 

10分鐘之內(nèi)讀OD值

 

計算

 

檢測范圍：2pg/ml→600pg/ml。

規(guī)格：    96T/盒

保存：    2-8℃

有效期：  6個月（2-8℃）。