豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1（TIMP-1）ELISA檢測試劑盒實(shí)驗原理

【資料簡介】

　　豬基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA檢測試劑盒說明書
 

　　使用方法：
 

　　測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng)，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
 

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。   24μg/ml    5號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　12μg/ml    4號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　6μg/ml     3號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　3μg/ml     2號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　1.5μg/ml   1號標(biāo)準(zhǔn)品    150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 

　　2. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。|
 

　　3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
 

　　4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
 

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
 

　　6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
 

　　7. 溫育：操作同3。
 

　　8. 洗滌：操作同5。
 

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
 

　　10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
 

　　11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
 

　　實(shí)驗規(guī)則：
 

　　1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%?？捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。
 

　　2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后，要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。
 

　　3、要在實(shí)驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。
 

　　4、實(shí)驗時，要使底物避光保存。
 

　　5、用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
 

　　6、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。
 

　　7、將液體加到酶標(biāo)孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸，可使槍頭上的液滴和孔壁接觸，液滴會自然流下去。
 

　　8、液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
 

　　9、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗，這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
 

　　10、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。
 

　　實(shí)驗注意事項：
 

　　1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗方案和樣本情況；
 

　　2)客戶盡可能提供實(shí)驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
 

　　3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
 

　　4)樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
 

　　實(shí)時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括*定量和相對定量)和定性分析。
 

　　主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
 

　　主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。