96T大鼠唾液酸ELISA 檢測試劑盒

【資料簡介】

大鼠唾液酸ELISA 檢測試劑盒

本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

試驗原理：
SA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知SA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將SA和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中SA的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

大鼠唾液酸ELISA 檢測試劑盒

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
2． 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

大鼠唾液酸ELISA 檢測試劑盒

樣品收集、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 mg/L （6號標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 mg/L （5號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 mg/L （4號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 mg/L （3號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 mg/L （2號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 mg/L （1號標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 mg/L （空白對照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

大鼠唾液酸ELISA 檢測試劑盒

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的SA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的SA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍：0-800mg/L

4、敏感度： 1.0 mg/L
Ruthenium Red 釕紅 [11103-72-3] 100mg
Azure B 天青B [531-55-5] 25g
Azelaic acid 壬二酸 [123-99-9] 250g
Aflatoxin G1 黃曲霉毒素G1 [1165-39-5] 1mg
Aflatoxin G2 黃曲霉毒素G2 [7241-98-7] 1mg
Aflatoxin M1 from Aspergillus flavus 黃曲霉毒素M1 [6795-23-9] 1mg
Agarose ITM 瓊脂糖 ITM [9012-36-6] 25g
Allura red 誘惑紅 [25956-17-6] 100g
Ethyl red 乙基紅 [76058-33-8] 50g
BPDA 聯(lián)苯二酐 [2420-87-3] 100g
Agarose IIITM 瓊脂糖 IIITM [9012-36-6] 5g
Agarose IIITM 瓊脂糖 IIITM [9012-36-6] 25g
Agarose IVTM 瓊脂糖 IVTM [9012-36-6] 5g
BCA, disodium salt 2,2’-聯(lián)喹啉-4,4’-二羧酸二鈉 [979-88-4] 25g
Benzil 聯(lián)苯甲酰 [134-81-6] 25g
Agarose IVTM 瓊脂糖 IVTM [9012-36-6] 25g
Agarose B, Low EEO 瓊脂糖 [9012-36-6] 50g
Agarose B, Low EEO 瓊脂糖 [9012-36-6] 250g
Agarose H 瓊脂糖H [9012-36-6] 50g
Agarose H 瓊脂糖H [9012-36-6] 250g
Agarose, Low melting 低熔點瓊脂糖 [9012-36-6] 5g
Agarose, Low melting 低熔點瓊脂糖 [9012-36-6] 25g
Benzimidazole 苯并咪唑 [51-17-2] 25g
Benzopurpurine 4B 苯紅紫4B [992-59-6] 25g
BAEE 苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽 [2645-08-1] 1g
Alcian yellow 阿利新黃GXS（） [61968-76-1] 50g
Ala-Gln 丙谷二肽 [39537-23-0] 1g
β-Alanine β-丙氨酸 [107-95-9] 100g
D-Alanine D-丙氨酸 [338-69-2] 100g
DL-Alanine DL-丙氨酸 [302-72-7] 500g
L-Alanine L-丙氨酸 [56-41-7] 100g
L-Alanine L-丙氨酸 [56-41-7] 500g
DL-Alaninol DL-氨基丙醇 [6168-72-5] 250ml
Albumin, from bovine Cohn fraction V pH 5.2 牛血清白蛋白 [9048-46-8] 50g
Albumin, from bovine pH 7.0 Fatty free 無脂肪酸牛血清白蛋白 [9048-46-8] 50g
Albumin, from bovine Protease free 無蛋白酶牛血清白蛋白 [9048-46-8] 50g
Albumin, from bovine pH 7.0 Low endotoxin 低內(nèi)毒素牛血清白蛋白 [9048-46-8] 50g