鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值與測定值

【資料簡介】

《中國藥典》1995年版二部附錄收載的細(xì)菌內(nèi)毒素試驗(yàn)檢查法，在鱟試劑靈敏度復(fù)核項(xiàng)下規(guī)定，當(dāng)靈敏度測定值是標(biāo)示值的二分之一或兩倍時(shí)（即λc=0.5～2.0λb），該批鱟試劑方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查并以λb作為該批鱟試劑的靈敏度。這項(xiàng)規(guī)定源于美國藥典。1980年美國藥典20版開始收入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，但未涉及鱟試劑靈敏度的復(fù)核，1985年第21版在該項(xiàng)試驗(yàn)的試驗(yàn)準(zhǔn)備項(xiàng)下增加這一要求，開始對內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品（RSE）的稀釋濃度未提出要求，只是要求每一濃度需重復(fù)4管，對不同濃度的zui低凝集點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)差（S）要求不得大于0.365，如果是8管（S）不得大于0.306，對測得的靈敏度（λc）要求在標(biāo)示值的0.5～2.0λb，這是zui早提出該項(xiàng)指標(biāo)與要求的*依據(jù)。1990年22版刪除了對（S）的要求。1995年版明確給出了內(nèi)毒素參考標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋濃度為2λ、λ、0.5λ、0.25λ，λ為鱟試劑標(biāo)簽上標(biāo)示的靈敏度。

《中國藥典》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法是在1988年衛(wèi)生部頒細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的基礎(chǔ)上又參考1995年版美國藥典經(jīng)修訂形成的。1988年的部頒標(biāo)準(zhǔn)主要是參考1985年美國藥典制訂的，因此在鱟試劑靈敏度測定中，要求對不同濃度的zui低凝集點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)差（S）進(jìn)行計(jì)算，而這一要求一直沿續(xù)到目前衛(wèi)生部《鱟試劑》標(biāo)準(zhǔn)中。1995年《中國藥典》細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為2λ、λ、0.5λ、0.25λ；（λ為鱟試劑標(biāo)簽上標(biāo)示的靈敏度），規(guī)定2λ為陽性，0.25λ為陰性，刪去S計(jì)算，因?yàn)樵诖藯l件下，計(jì)算S失去意義（不可能大于0.365），所以直接計(jì)算λc。只要λc=0.5～2.0λb，該批鱟試劑靈敏度即符合規(guī)定，并以標(biāo)示靈敏度用于產(chǎn)品內(nèi)毒素檢驗(yàn)。這是《中國藥典》細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定λc=0.5～2.0λb的經(jīng)過和依據(jù)。

需要討論的問題是，當(dāng)鱟試劑的使用者購入試劑后，按規(guī)定需要復(fù)核試劑靈敏度，如果某批試劑標(biāo)示靈敏度為0.5EU/ml，復(fù)核測定結(jié)果為1EU/ml，按規(guī)定則判斷該批試劑靈敏度合格，可以用于藥品內(nèi)毒素檢驗(yàn)，并以標(biāo)示靈敏度為準(zhǔn)。此時(shí)，當(dāng)使用者所要檢驗(yàn)藥品的內(nèi)毒素限值應(yīng)小0.5EU/ml時(shí)，檢驗(yàn)者擔(dān)心，因復(fù)核靈敏度的測定值（λc=1EU/ml）超過藥品內(nèi)毒素限值（L=0.5EU/ml），如果檢驗(yàn)結(jié)果為陰性，是否會出現(xiàn)漏檢，導(dǎo)致臨床發(fā)生不良反應(yīng)呢?這是一個(gè)普遍關(guān)心的問題，早在衛(wèi)生部頒細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法剛剛執(zhí)行時(shí)，就曾經(jīng)討論過這一問題。

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（凝膠法）是一種限度試驗(yàn)，它與熱原檢查法具有相同的性質(zhì)，超過某一限度判定供試品不合格，一次檢測不可能知道供試品中內(nèi)毒素量超過多少。低于某一限度判供試品合格。因此，它不像一般化學(xué)、物理學(xué)測試方法允許誤差較小，雖然從1968年鱟試驗(yàn)（Limulus Test）建立后，曾對試管內(nèi)凝膠形成的性狀，主觀地分為六檔、五檔，試圖使實(shí)驗(yàn)結(jié)果些，但每檔之間仍然是倍倍之差、甚至十倍之差，這種試驗(yàn)允許的實(shí)驗(yàn)誤差如此之大，令從事理化檢驗(yàn)人員難以理解。

問題的關(guān)鍵是，當(dāng)λc=2λb時(shí)，用這種鱟試劑檢測的結(jié)果是否會出現(xiàn)漏檢?筆者認(rèn)為，對內(nèi)毒素而言，不可能出現(xiàn)漏檢。因?yàn)?，從理論上，鱟試劑的靈敏度是以致熱活性zui強(qiáng)的菌株［E.coli O113∶H10∶K（-）］產(chǎn)生的內(nèi)毒素為標(biāo)準(zhǔn)品確定效價(jià)而標(biāo)定的，人工提制的內(nèi)毒素，其致熱活性較天然內(nèi)毒素的致熱性要高出10余倍，而鱟試劑對內(nèi)毒素的檢測，與細(xì)菌的種屬來源無關(guān)，這一點(diǎn)已討論過。因此，絕大多數(shù)情況下，會出現(xiàn)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查不合格，熱原檢查合格，臨床也不一定出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)。既如此，是否失去了內(nèi)毒素檢查的意義了呢?否，因?yàn)樵趦?nèi)毒素檢查不合格，臨床未出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)時(shí)，這只是藥品生產(chǎn)者的一種僥幸，只能說明樣品中污染的內(nèi)毒素，其致熱活性較人工提制的低，如果污染的內(nèi)毒素致熱活性接近人工提制的內(nèi)毒素，臨床就可能發(fā)生熱原反應(yīng)，因此內(nèi)毒素檢查不合格品，即使是通過了熱原檢查，也不可避免出現(xiàn)臨床發(fā)熱反應(yīng)。這正是目前各國藥典紛紛收載細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，在很多藥品品種檢驗(yàn)中以其代替熱原檢查法的原因之一。

另一方面，當(dāng)λc=0.5λb時(shí)，這種情況容易解釋，即檢驗(yàn)者會嚴(yán)判自己的制品，如zui近報(bào)道，因使用福州鱟試劑λb=0.5EU/ml，而λc=0.25EU/ml，使一批*不合格，改用廈門鱟試劑λb=0.5EU/ml，而λc=0.5EU/ml，該批制品合格。

綜上所述，在對樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查前，復(fù)核鱟試劑的靈敏度是必要的，只要鱟試劑符合《中國藥典》規(guī)定，是不會發(fā)生漏檢內(nèi)毒素，臨床出現(xiàn)熱原反應(yīng)的。