柱式植物RNAout

【資料簡介】

柱式植物RNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是天澤基因植物RNAOUT（CAT#：3080）的柱式升級產(chǎn)品，它結(jié)合了植物RNAOUT的性（其效果在近五十多種各類植物中得到驗(yàn)證，植物名單見植物RNAOUT產(chǎn)品介紹的附錄）和天澤基因柱式純化系列產(chǎn)品的快捷性。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
. 操作更加簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘，比植物RNAOUT快一倍。
2. RNA純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
3. 小RNA回收效率更高。
4. 適用于所有用植物RNAOUT能提出RNA的植物（注:對有些植物可能需要在溶液A中額外添加RVC）。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。
6. 性價(jià)比高于進(jìn)口的柱式植物RNA提取產(chǎn)品。
7. 一站式，提供RNase-free的樣品收集管。
規(guī)格及成分 成 份 50次包裝
溶液A 50 mL
溶液B 5 mL
溶液C 50 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脫液 0 mL
使用手冊 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 . 估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要00-200 mg植物葉片、或50-00 mg植物種子、或200-500 mg植物果實(shí)。
2. 先將新鮮植物切成小塊（保存在RNALOCKER中的植物組織需用紙吸去RNALOCKER液體后再剪切成小塊），放入0-5 mL塑料離心管中，加入 mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織，硯磨完后加入 mL溶液A。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。
3. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的.5 mL塑料離心管中（可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片）。有的植物組織（比如果實(shí)）含有大量水份，勻漿液會多于 mL，轉(zhuǎn)移時也只取 mL。
4. 在離心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自備氯仿，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
5. 室溫2000-5000 g離心3-5分鐘，兩相間將有約5-0毫米厚的細(xì)胞破碎物。
6. 將上清液（約0.6 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的.5 mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。留下00 uL上清液不取。
7. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生（對某些植物，屬于正常現(xiàn)象），千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。
8. 將一半的溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，3000-5000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 將剩下的一半溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中， 3000-5000 g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
0. 加0.7 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第7步加入溶液C后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4、0.3和0.3 mL。
. 室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
2. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中，加入50-00 uL RNA洗脫液，室溫放置-2分鐘。
3. 3000-5000 g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
4. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：44，2000）。
5. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-0 μL RNA溶于TE緩沖液中（pH7.5-8.2之間）檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（ OD260的RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量（濃度X體積）和產(chǎn)率（RNA產(chǎn)量/組織用量）。
6. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在.8-2.之間（具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)），高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。