大提柱式土壤DNAout

【資料簡(jiǎn)介】

大提柱式土壤DNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn)
本產(chǎn)品是在本公司柱式土壤DNAOUT（CAT：7205-50）基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)而
得的大提升級(jí)產(chǎn)品，用于從各種土壤樣品和河海沉積物中大量提取高質(zhì)量的
DNA的試劑。跟柱式土壤DNAOUT相比它具有下列特點(diǎn)：
. 處理量大，一次zui多可以處理20克的土壤樣品。
2. 去污染效果更好，得到的DNA可以直接作為PCR模板或酶切，不需要
再進(jìn)行去腐殖酸處理。
3. 操作過(guò)程更加簡(jiǎn)單快速，整個(gè)操作只需要0多分鐘，擴(kuò)容性好。
4. 產(chǎn)量高，每克土壤一般可以提取到5-50 ug DNA，片段長(zhǎng)度在20-50 Kb，
OD260/280一般都在.8以上。
5. 適合于各種土壤（包括河海沉積物）。
規(guī)格及成分
成 份 4次包裝（80928）
溶液A 50 mL
溶液B 50 mL
溶液C 00 mL
離心吸附柱 4套
通用洗柱液 00 mL
通用洗脫液 0 mL
使用手冊(cè) 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸，4℃保存，保存期為一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法
. 65℃預(yù)熱溶液A，待其沉淀溶化后充分混勻，取0 mL加入到.5 mL
塑料離心管中并放置于65℃待用。
2. 稱取3-20 g的土壤，加入到含預(yù)熱溶液A的離心管中，震蕩器上劇烈震
蕩5-0分鐘。
3. 將離心管置于65℃水浴中保溫至少5分鐘。
4. 5000-7000 rpm室溫離心3-5分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到一新離心管中（上清
液一般呈淡黃色或深棕色，實(shí)際顏色取決于腐殖酸的含量，上清液的體積
一般為6-8 mL）。
5. 在上清液中加入等體積的溶液B，上下顛倒30秒充分混勻，溶液將呈白
色或淡黃色混濁狀。
6. 將離心管冰浴至少5分鐘。
7. 5000-7000 rpm室溫離心3-5分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的50 mL離心管中，
上清液顏色將比第4步得到的上清的顏色稍淡，體積在4 mL左右。
注意：下面第8-第9步的氯仿抽提操作可以省略，直接進(jìn)入第0步，但DNA
的產(chǎn)量會(huì)低50%左右，OD260/280在.7-.8。
8. 加入4 mL的氯仿（自備），震蕩器上充分振蕩30秒混勻。注意:一定要讓
管底的溶液震蕩起來(lái)。
9. 5000-7000 rpm室溫離心3-5分鐘，小心轉(zhuǎn)移上清到新離心管中，體積
在 mL左右。說(shuō)明：離心后兩相交界面將有白色膜狀物，其中有機(jī)相
部分顏色較深，一般呈淡棕色。上清的顏色取決于土壤中腐殖酸的含量。
0. 加入.5倍體積的溶液C，上下顛倒30秒混勻。
. 分兩次上柱（即先轉(zhuǎn)移一半的混合液到離心吸附柱中，5000-7000 rpm
室溫離心分鐘，棄穿透液，然后再將剩下的混合液到離心吸附柱中，
5000-7000 rpm室溫離心半分鐘，棄穿透液）。
2. 加0 mL通用洗柱液到離心吸附柱中，5000-7000 rpm室溫離心分
鐘，棄穿透液。
3. 重復(fù)上個(gè)步驟一次。
4. 5000-7000 rpm室溫再離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗
柱液會(huì)污染DNA。
5. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一新的50 mL塑料離心管中，加入 mL 通用洗脫
液。
6. 室溫放置離心吸附柱-2分鐘。
7. 5000-7000 rpm室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為DNA樣品。