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大鼠三磷酸腺苷(ATP)elisa試劑盒使用說明書

2013年09月24日 06:41:30人氣:715來源:上海士鋒生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞大鼠三磷酸腺苷試劑盒,大鼠(ATP)試劑盒
【資料簡介】

大鼠三磷酸腺苷(ATP酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明 

實驗原理:

   本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠三磷酸腺苷(ATP水平。用純化的大鼠三磷酸腺苷(ATP抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入三磷酸腺苷(ATP,再與HRP標記的三磷酸腺苷(ATP抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的三磷酸腺苷(ATP呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠三磷酸腺苷(ATP濃度。

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8保存

標準品:720 nmol/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8保存

標準品稀釋液

1.5ml×1

1.5ml×1

2-8保存

酶標試劑

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

樣品稀釋液

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8保存

 

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?/span>2-8的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟:

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為480nmol/L,320nmol/L ,160nmol/L80nmol/L,40nmol/L)。

2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。

4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.     測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

注意事項:

1.  試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.  濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。

3.  各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,使用排槍加樣。

4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.  底物請避光保存。

7.  嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.  本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

 

文本框:  計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD     

值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋      

倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

倍數(shù),即為樣品的實際濃度。                  

 

                                             

 

(此圖僅供參考)

 

 

 

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%11%

 

 

檢測范圍:                                              

20nmol/L -500nmol/L

                                        

                           

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:;2-8。

2.有效期:6個月

 

上海士鋒生物科技有限公司作者

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