大鼠B細胞淋巴瘤因子酶聯試劑盒操作步驟

【資料簡介】

 操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

200μg/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

100μg/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

50μg/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

25μg/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

12.5μg/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。

操作程序總結：

計算以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存： 2-8℃。

2．有效期：6 個月