如何使用凱氏法測(cè)定氮實(shí)驗(yàn)的步驟和說(shuō)明

【資料簡(jiǎn)介】

測(cè)定原理

待測(cè)天然含氮有機(jī)物與濃硫酸共熱時(shí)，被氧化成為二氧化碳和水，而氮轉(zhuǎn)變成氨，氨再與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。為了加速有機(jī)物質(zhì)的分解反應(yīng)，在消化時(shí)常加入促進(jìn)劑，硫酸銅可用作催化劑，硫酸鉀或硫酸鈉可提高消化液的沸點(diǎn)，氧化劑如過(guò)氧化氫也能加速反應(yīng)。

操作方法

樣品處理 測(cè)定某一固體樣品中蛋白質(zhì)的含量都是按100克物質(zhì)的干重中所含蛋白質(zhì)的克數(shù)來(lái)表示。因此在定氮前應(yīng)先將固體樣品中的水分除去。步驟：先將樣品磨細(xì)，在已稱重的稱量瓶中稱入一定量樣品，然后置105度（100度無(wú)法除去非游離水）的烘箱內(nèi)干燥2小時(shí)后稱重，以后每1小時(shí)再稱重，直至2次稱重?cái)?shù)不變?yōu)橹埂?/p>

若樣品屬于液體物質(zhì)，可取一定體積經(jīng)適當(dāng)稀釋后，取一定量進(jìn)行消化。

消化

根據(jù)樣品量的多少選擇適宜的凱氏燒瓶4個(gè)（此處以50毫升為例），其中2個(gè)為對(duì)照。向燒瓶?jī)?nèi)加入準(zhǔn)確稱量的樣品，注意要把樣品加至燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。另外2個(gè)作空白對(duì)照，好對(duì)樣品進(jìn)行校正。

在每個(gè)燒瓶中加入約300毫克硫酸鉀-硫酸銅混合物（硫酸鉀：五水硫酸銅=3：1、6：1或10：1均可），再用量筒加入3毫升濃硫酸。將上述4個(gè)凱氏燒瓶放在通風(fēng)良好處（在通風(fēng)櫥中進(jìn)行）加熱消化。先用小火加熱至沸騰。此時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量泡沫，應(yīng)特別注意不能讓黑色物質(zhì)上升到燒瓶頸部，否則將嚴(yán)重影響分析結(jié)果。當(dāng)混合物停止冒泡，蒸汽與二氧化硫也均勻地放出時(shí)，將火焰調(diào)節(jié)到保持瓶?jī)?nèi)液體微微沸騰。假若發(fā)現(xiàn)瓶頸上有黑色顆粒，應(yīng)小心地將燒瓶?jī)A斜振搖，用消化液將其洗下。在消化過(guò)程中要時(shí)常轉(zhuǎn)動(dòng)燒瓶，使全部樣品都浸在消化液中。當(dāng)消化液呈清澈淡藍(lán)色時(shí)即告消化結(jié)束。時(shí)間一般在5~6小時(shí)！若樣品中含賴氨酸或較多時(shí)，消化時(shí)間需要延長(zhǎng)1~2倍。因?yàn)檫@兩種氨基酸中的氮在短時(shí)間內(nèi)不易消化*。

蒸餾

采用改良式凱氏定氮儀。

1、洗滌蒸餾儀：用硼酸指示劑（取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示劑約1毫升，搖勻后呈紫紅色即可；混合指示劑：50毫升0.1%甲烯藍(lán)乙醇+200毫升0.1%甲基紅乙醇，存于棕色瓶中）檢測(cè)是否清洗干凈。干凈標(biāo)準(zhǔn)：指示劑不變色。

2、樣品和空白的蒸餾：取2毫升稀釋消化液至加樣口加入反應(yīng)室，關(guān)閉加樣口，另取1個(gè)裝硼酸指示劑的三角瓶接于冷凝管下端。取30%氫氧化鈉（W/W）溶液約10毫升，從加樣口緩慢加入，當(dāng)未加完時(shí)關(guān)閉，并加入約3毫升蒸餾水，再繼續(xù)緩慢加入一半后關(guān)閉，讓剩下的水作液封。將加熱器重新放在蒸汽發(fā)生器下加熱（注：在清洗儀器完畢后應(yīng)拿走加熱器），待三角瓶中液體由紫紅變成鮮綠色起開(kāi)始計(jì)時(shí)，蒸餾5分鐘，然后移動(dòng)三角瓶使液面離開(kāi)冷凝管口約1厘米，并用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外周，繼續(xù)蒸餾1分鐘?？瞻淄瑯?。

3、清洗儀器：同上，不*指示劑。

滴定

用0.0100mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸（要標(biāo)定，費(fèi)時(shí)）滴定三角瓶中收集的氨，直至硼酸指示劑由綠變紫紅。

注意：蒸餾時(shí)試驗(yàn)室環(huán)境中切忌有堿性霧氣，否則要影響分析精度。