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分子生物學(xué)常用試劑的配制

2009年12月18日 08:35:59人氣:1537來源:上海勁馬實驗設(shè)備有限公司

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【資料簡介】

瓊脂糖凝膠的配制
  根據(jù)所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖,加入相應(yīng)電泳緩沖液中,用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖*溶解,加入適量 EB 混勻,適當(dāng)冷卻后傾入凝膠鑄槽中,插入梳子,凝膠厚度不超過梳孔,如有氣泡產(chǎn)生則用玻璃棒驅(qū)除,不能過早拔除梳子,應(yīng)待凝膠*凝結(jié)后才能拔除梳子。


3
P1、P2、P3的配制P1 的配制:在 800ml 去離子水中溶入 Tris  6.06g,Na2EDTA?2H2O 3.72g,用 HCl 調(diào)整 pH  8.0,用去離子水調(diào)整容積至1,每升P1內(nèi)加入RNaseA100mg。

P2 
的配制:在 950ml 去離子水中溶入 NaOH 8.0g,20SDS 50ml,調(diào)整容積至 1 升。

P3 
的配制:在 500ml 去離子水中溶入醋酸鉀 294.5g,用冰醋酸調(diào)整 pH 值至 5.5,用去離子水調(diào)整容積至1


4
.常用緩沖液:

TE
pH 7.4
10mmol/LTris?Cl (pH7.4)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 7.6
10mmol/LTris?Cl (pH7.6)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
pH 8.0
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STE(
亦稱
 TEN)
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
STET
0.1mmol/L NaCl
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
1mmol/L EDTA(pH8.0)
5%Triton X-100
TNT
10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
150mmol/L NaCl
0.05% Tween 20
電泳緩沖液

Tris-
乙酸(TAE):50×濃貯存液(每升):242g Tris 


5   7.1ml 
冰乙酸

100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用時再稀釋50倍。


Tris-
磷酸(TPE):10×濃貯存液(每升):108g Tris 

15.5ml 85
%磷酸(1.679g /ml

40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用時再稀釋10倍。


Tris-
硼酸(TBE):濃貯存液(每升):54g Tris 

27.5g 
硼酸
20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用時再稀釋10倍。


堿性緩沖液:使用液(每升):
5ml10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)

Tris-
甘氨酸:濃貯存液(每升):15.1g Tris 

94g 
甘氨酸(電泳級)(pH8.3

50ml 10%SDS
(電泳級)

2×SDS 
凝膠加樣緩沖液

100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)
200mmol/L 
二硫蘇糖醇(DTT

4%SDS
(電泳級)

0.2
%溴酚藍

20
%甘油


30
%丙烯酰胺:

29g 丙烯酰胺和1gN,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中,加熱至37溶解之,補加

水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑過濾除菌查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置棕色瓶中

保存于室溫。


10mol/L 
乙酸銨:

770g 乙酸銨溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。


1mol/LCaCl2

200ml純水中(Milli-Q水或相當(dāng)級別的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20。


2.5mol/LCaCl2

20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20。


1mol/L 
二硫蘇糖醇(DTT):

20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20


0.5mol/LEDTA(pH8.0)

 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0,然后定容至1,分裝后高壓滅菌備用。


溴化乙錠(10mg/ml):

100ml水中加入1g 溴化乙錠,磁力攪拌數(shù)小時以確保其*溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中,保存于室溫。


1mol/LMgCl2

800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1,分裝成小份并高壓滅菌備用。


酚:氯仿:

把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層,保存于4


磷酸緩沖鹽溶液(PBS):

800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO40.24gKH2PO4,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH 值至 7.4,加水定容至 1 升,高壓蒸汽滅菌 20min。保存于室溫。


乙酸鉀溶液(用于堿裂解):

60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。


3mol/L 
乙酸鈉(pH5.2  7.0)

800ml水中溶解408.1g 三水乙酸鈉,用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH7.0,加水定容至1,分裝后高壓滅菌。


1mol/LTris

800ml水中溶解121.1gTris堿,加入濃HCl調(diào)節(jié)pH至所需值。

pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
應(yīng)使溶液冷至室溫后方可zui后調(diào)定pH值,加水定容至1,分裝后高壓滅菌。


Tris 
緩沖鹽溶液(TBS):

800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl3gTris堿,加入0.015酚紅并用HCl調(diào)pH值至7.4,用蒸餾水定容至1,分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡,于室溫保存。


5mmol/LNH4Ac 
溶液:

秤取乙酸銨192.7g,加重蒸水250ml混勻,加重蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2滅菌20min。


10mg/mlBSA
(小牛血清白蛋白)溶液:

秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4冰箱貯存?zhèn)溆谩?/span>


10%
十二烷基硫酸鈉(SDS):

900ml水中溶解100g 電泳級SDS,加熱至68助溶,加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2,加入水定容至1L,分裝備用。

 

 

上海勁馬實驗設(shè)備有限公司作者

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