48Ｔ基質(zhì)金屬蛋白酶9人ELISA試劑盒說(shuō)明書

【資料簡(jiǎn)介】

基質(zhì)金屬蛋白酶9 （MMP-9）人ELISA試劑盒說(shuō)明書
本試劑僅供研究使用 標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原理：
MMP-9試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知MMP-9濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將MMP-9和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌人ELISA試劑盒去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中MMP-9的濃度呈比例關(guān)系。
人ELISA試劑盒自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。
實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項(xiàng)
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）人ELISA試劑盒相應(yīng)的MMP-9標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的MMP-9含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測(cè)值范圍：0-800ng/ml
4、敏感度： 1.0 ng/ml

Y139695 辛基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 乙基己基三嗪酮相關(guān)物質(zhì)C
Y139696 氟替卡松丙酸酯相關(guān)物質(zhì)混合物標(biāo)準(zhǔn)品 25mg NA 
Y139697 氟替卡松丙酸酯鼻噴劑分離度用混合物標(biāo)準(zhǔn)品 25mg NA 
Y139698 醋酸戈那瑞林雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品 10mg NA 
Y139699 重組蛋白A標(biāo)準(zhǔn)品 ea NA 
Y139700 卡巴拉汀酒石酸鹽K-異構(gòu)體 20mg NA 
Y139701 群勃龍醋酸酯系統(tǒng)適用性混合物 30mg NA 
Y139702 依諾肝素鈉溶液用于生物測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品 1ml NA
Y139703 胺碘酮相關(guān)物質(zhì)E標(biāo)準(zhǔn)品 Amiodarone Related Compound E 25mg Amiodarone R...
Y139704 尼泊金甲酯標(biāo)準(zhǔn)品 Methylparaben  125mg 99-76-3 
Y139705 丙戊酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 0．25ml 99-67-2 
Y139706 水楊酸相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 100mg 9-96-7 
Y139707 丙戊酸標(biāo)準(zhǔn)品 Valproic Acid  500mg 99-66-1 
Y139708 昂丹司瓊雜質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品 30mg 99614-64-9 
Y139709 昂丹司瓊標(biāo)準(zhǔn)品 Ondansetron  300mg 99614-02-5 
Y139710 瑞格列奈相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 99469-99-5 
Y139711 鹽酸文拉法辛標(biāo)準(zhǔn)品 Venlaine Hydrochloride  100mg 99300-78-4 
Y139712 酒石酸唑吡坦標(biāo)準(zhǔn)品 Zolpidem Tartrate CIV 200mg 99294-93-6 
Y139713 堿式?jīng)]食子酸鉍標(biāo)準(zhǔn)品 Bismuth Subgallate （AS） 2g 99-26-3
Y139714 克拉霉素混合物R標(biāo)準(zhǔn)品 10mg 992-62-1
Y139715 紅霉素相關(guān)物質(zhì)N標(biāo)準(zhǔn)品 50mg 992-62-1
Y139716 吡嗪酰胺標(biāo)準(zhǔn)品 Pyrazinamide  200mg 98-96-4 
Y139717 （-）-表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯標(biāo)準(zhǔn)品 20mg 989-51-5
Y139718 煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品 Niacinamide （Vitamin B3） 500mg 98-92-0 
Y139719 異丙苯標(biāo)準(zhǔn)品 Cumene 1.2ml×3ampules 98-82-8
Y139720 甲酚曲唑三硅氧烷相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 25mg 98809-58-6
Y139721 醋酸倍他米松標(biāo)準(zhǔn)品 Betamethasone Acetate 500mg 987-24-6
Y139722 阿散酸標(biāo)準(zhǔn)品 Arsanilic Acid 25mg 98-50-0
Y139723 琥珀酸美托洛爾標(biāo)準(zhǔn)品 Metoprolol Succinate  200mg 98418-47-4 
Y139724 非那雄胺標(biāo)準(zhǔn)品 Finasteride  200mg 98319-26-7 
Y139725 馬來(lái)酸溴苯那敏標(biāo)準(zhǔn)品 Brompheniramine Maleate 125mg 980-71-2
Y139726 S-腺苷-L-高半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品 S-Adenosyl-L-Homocysteine 50mg 979-92-0
Y139727 泮托拉唑相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 人ELISA試劑盒 20mg 97963-62-7 
Y139728 戊酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品 Estradiol Valerate 100mg 979-32-8
Y139729 二硫化四乙基秋蘭姆標(biāo)準(zhǔn)品 Disulfiram 200mg 97-77-8
Y139730 螺內(nèi)酯相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 100mg 976-71-6 
Y139731 尿囊素標(biāo)準(zhǔn)品 Allantoin 200mg 97-59-6
Y139732 芐星頭孢匹林標(biāo)準(zhǔn)品 Cephapirin Benzathine 100mg 97468-37-6
Y139733 蒼白松果菊標(biāo)準(zhǔn)品 1g 97281-15-7
Y139734 托吡酯標(biāo)準(zhǔn)品 Topiramate  150mg 97240-79-4 
Y139735人ELISA試劑盒 睪內(nèi)酯酮標(biāo)準(zhǔn)品 Testolactone CIII 125mg 968-93-4