鹽析法純化免疫球蛋白

【資料簡介】

(一) 原理

蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度是由蛋白質(zhì)周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的。當用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液，中性鹽對水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，于是蛋白質(zhì)分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時，中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后，由于離子強度發(fā)生改變，蛋白質(zhì)表面電荷大量被中和，更加導致蛋白溶解度降低，使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀。

(二) 主要材料

1. 試劑：

(1) 正常人混合血清；滅菌生理鹽水。

(2) 飽和硫酸銨溶液的配制：稱（NH₄）₂SO₄（AR）400～425克，以50～80℃之蒸餾水500ml溶解，攪拌20分鐘，趁熱過濾。冷卻后以濃氨水（15N NH₄OH）調(diào)PH至7.4。配制好的飽和硫酸銨，瓶底應(yīng)有結(jié)晶析出。

(3) 萘氏試劑配制： 稱HgI 11.5克，KI8克，加蒸餾水至50ml，攪拌溶解后，再加入20%NaOH 50ml。

(4) 0.02M，PH7.4磷酸鹽緩沖鹽液（Phosphate Buffered Saline PBS）配制。 
　 　貯存液： 
　　A液：0.2M Na₂HPO₄：Na₂HPO₄·12H₂O 71.64克，加蒸餾水至1000ml； 
　　B液：0.2M NaH₂P4：NaH₂P₄·2H₂O 3.12克，加蒸餾水至1000ml；
　　應(yīng)用液：取A液81ml加B液19ml混合，再以生理鹽水作10倍稀釋即成。

(5) 0.1M，PH7.4磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer PB）配制：
　　將上述A液取81ml與B液19ml混合，再以蒸餾水對倍稀釋即成。

(6) 20%磺基水楊酸。

2. 器材：

普通冰箱、離心機、電磁攪拌器、751桮型紫外分光光度計、扭力天平、粗天平。 
　　透析袋、尼龍繩、細竹棒、精密PH試紙（PH5.5～9.0）、子、小剪刀。 
　　燒杯、量筒、吸管、滴管、滅菌小瓶、試管等。