細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶原位明膠酶譜法熒光染色試劑盒說明書

【資料簡介】

主要用途

 細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）原位明膠酶譜法（in situ zymography）熒光染色試劑是一種旨在通過異硫氰酸熒光素標(biāo)記的明膠作為底物，針對未固定處理的細(xì)胞樣品予以染色處理，基質(zhì)金屬蛋白酶切離底物產(chǎn)生高度綠色熒光，來定位細(xì)胞中的基質(zhì)金屬蛋白酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2和9的分析。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，敏感度高，熒光清晰，重復(fù)性好。

技術(shù)背景

基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases；MMPs）是一類結(jié)構(gòu)高度同源的分泌型或膜相關(guān)性鋅內(nèi)肽酶的總稱，因含有金屬（鋅、鈣）離子而得名。迄今為止發(fā)現(xiàn)的MMPs至少有28種，幾乎能降解除多糖以外的全部細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix）成分，同時參與胚胎發(fā)育、形態(tài)形成、胚泡植入（blastocyst）、血管形成、組織再吸收（tissue resorption）、疾病發(fā)生，例如關(guān)節(jié)炎、癌細(xì)胞浸入轉(zhuǎn)移等。根據(jù)降解的底物不同可將MMPs分為4大類：（1）膠原酶：MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和蛋白多糖；（2）明膠酶（Ⅳ型膠原酶）：MMP2、MMP9，又稱明膠酶A、B，主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型膠原和彈性纖維；（3）基質(zhì)溶解素：MMP3、MMP7、MMP16、MMP11，主要作用于纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、彈力纖維、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ膠原及MMP1、MMP8、MMP9；（4）膜型金屬蛋白酶：MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP，主要作用于明膠、Ⅳ型膠原、MMP2。體內(nèi)絕大多數(shù)細(xì)胞并不儲備MMPs，當(dāng)需要MMPs的信號傳遞到細(xì)胞后才臨時合成，合成的MMPs以無活性的酶原（proenzyme）形式分泌到細(xì)胞外，隨后被多種蛋白酶和非蛋白酶水解以及熱處理激活，一種激活的MMPs可激活另一種MMPs，形成瀑布效應(yīng)。原位明膠酶譜法熒光染色（in-situ fluorescence zymography）技術(shù)在于提高基質(zhì)金屬蛋白酶檢測的敏感性，使用異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的明膠作為底物，經(jīng)過基質(zhì)金屬蛋白酶水解后產(chǎn)生熒光多肽，據(jù)此在熒光顯微鏡下檢測酶的活性和位置。