噬菌體鋪平板產(chǎn)生噬斑實(shí)驗(yàn)

【資料簡介】

實(shí)驗(yàn)方法原理    這種方法能從單個噬斑中分離出純的噬菌體部落，而且可以對噬菌體母液進(jìn)行濃度測定。
實(shí)驗(yàn)材料    大腸桿菌
試劑、試劑盒    麥芽糖培養(yǎng)基
儀器、耗材    平板微波爐試管加熱器毛細(xì)管
實(shí)驗(yàn)步驟    
1.  在含0.2 %麥芽糖和10 mmol/L MgSO4的λ肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌至飽和。加0.3 ml的大腸桿菌培養(yǎng)液到5個8 mmX80 mm的試管里。

在把加有頂層瓊脂培養(yǎng)基的瓶子放到微波爐前一定要松開瓶蓋！

2.  在微波爐解凍狀態(tài)下溶化頂層瓊脂培養(yǎng)基，或煮沸水浴15 min。室溫下冷卻瓶子5 min，然后將加有溶化瓊脂培養(yǎng)基的瓶子放于45~50°C水浴。

3.  用SM將噬菌體溶菌液進(jìn)行連續(xù)稀釋（如100倍的稀釋)。加*個稀釋液0.1 ml到 一只大腸桿菌試管里，再加第二個稀釋液的0.1 ml到另一只試管里，其他依次稀釋。標(biāo)記好大腸桿菌/噬菌體混合物的試管，以便它們彼此不混淆。將試管放于室溫培養(yǎng)20 min。

4.  將試管移到37 °C水浴或加熱器10 min。從水浴取出試管。

5.  往每一只試管加2.5 ml的頂層瓊脂培養(yǎng)基，輕輕晃動使其混合，將試管內(nèi)容物倒到平板上。輕柔地傾斜平板使瓊脂糖培養(yǎng)基平鋪到整個平板表面。將平板放于37°C恒 溫箱培養(yǎng)6~12 h。

6.  從一個噬斑不太密集的稀釋平板上用無菌毛細(xì)管或牙簽挑選單個噬斑。為了以備噬斑將來使用，用毛細(xì)管切下一塊含有噬斑的瓊脂并把它彈到含1 ml的SM的試管里 （或把牙簽尖放到液體里輕輕攪動）。如果需要，計(jì)數(shù)一個稀釋平板上的噬斑并估計(jì)在zui初的庫里感染性噬菌體數(shù)。
收起 
注意事項(xiàng)    
1.  所有與大腸桿菌接觸的材料都應(yīng)是無菌的。

2.  在把加有頂層瓊脂培養(yǎng)基的瓶子放到微波爐前一定要松開瓶蓋！

3.  制備同時符合以下兩個條件的對照平板：沒被感染的大腸桿菌的菌苔和不含細(xì)胞的頂層瓊脂培養(yǎng)基。