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還原糖和總糖的測定實(shí)驗

2015年08月06日 13:36:06人氣:169來源:上海彩佑實(shí)業(yè)有限公司

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關(guān) 鍵 詞還原糖和總糖的測定實(shí)驗
【資料簡介】

實(shí)驗方法原理    各種單糖和麥芽糖是還原糖,蔗糖和淀粉是非還原糖。利用溶解度不同,可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來,再用酸水解法使沒有還原性的雙糖和多糖*水解成有還原性的單糖。在堿性條件下,還原糖將3,5-二硝基水楊酸還原為3-氨基-5-硝基水楊酸(棕紅色物質(zhì)),還原糖則被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物,在一定范圍內(nèi),還原糖的量與棕紅色物質(zhì)深淺的程度呈一定的比例關(guān)系,在540nm波長下測定棕紅色物質(zhì)的消光值,查對標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算,便可分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。多糖水解時,在單糖殘基上加了一分子水,因而在計算中須扣除已加入的水量,測定所得的總糖量乘以0.9 即為實(shí)際的總糖量。
實(shí)驗步驟    
一、實(shí)驗材料、儀器和試劑

1、實(shí)驗材料:面粉。

2、儀器: (1) 25ml *或刻度試管×11;(2) 大離心管或玻璃漏斗×2;(3) 燒杯:100ml×1;(4)三角瓶:100ml×1;(5) 容量瓶:100ml×3;(6) 刻度吸管:1ml×11、2ml×4、10ml×1;(7) 恒溫水浴;(8)沸水??;(9) 離心機(jī)(過濾法不用此設(shè)備);(10)電子天平;(11)分光光度計;

3、試劑:

(1) 1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液:準(zhǔn)確稱取 100 mg分析純葡萄糖(預(yù)先在 80 ℃烘至衡重),置于小燒杯中,用少量蒸餾水溶解后,定量轉(zhuǎn)移至100ml的容量瓶中,以蒸餾水定容至刻度,搖勻,冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

(2) 3,5-二硝基水楊酸試劑:將6.3g 3,5-二硝基水楊酸和262ml 2NNaOH 溶液,加到500ml含有185g酒石酸甲鈉的熱水溶液中,再加5g結(jié)晶酚和5g亞硫酸鈉,攪拌溶解。冷卻后加蒸餾水定容至1000ml,貯于棕色瓶中備用。

(3) 碘-*溶液:稱取5g碘和10g*,溶于100ml 蒸餾水中。

(4) *指示劑:稱取0.1g*,溶于250ml 70%乙醇中。

(5) 6NHCl

(6) 6NNaOH

二、操作步驟

1、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線:

取7支具有25ml刻度的*或試管,編號,按下表所示的量,加入濃度為1mg/ml的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和3,5-二硝基水楊酸試劑。


將各管搖勻,在沸水浴中加熱5分鐘,取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫,再以蒸餾水定容至25ml刻度處,用橡皮塞塞住管口,顛倒混勻(如用大試管,則向每管加入21.5ml蒸餾水,混勻)。在540nm波長下,用0號管調(diào)零,分別讀取1-6號管的消光值。以消光值為縱坐標(biāo),葡萄糖毫克數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2、樣品中還原糖和總糖的測定:

(1)樣品中還原糖的提?。?/p>

準(zhǔn)確稱取2g食用面粉,放在100ml的燒杯中,先以少量的蒸餾水調(diào)成糊狀,然后加50ml蒸餾水,攪勻,置于50℃恒溫水浴中保溫20分鐘,使還原糖浸出。離心或過濾,用20ml蒸餾水洗殘渣,再離心或過濾,將兩次離心的上清液或濾液全部收集在100ml的容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,混勻,作為還原糖待測液。

(2)樣品中非還原糖的水解和提?。?/p>

準(zhǔn)確稱取1 g食用面粉,放在100ml 的三角瓶中,加入10 ml 6NHCl及15ml 蒸餾水,置于沸水浴中加熱水解30分鐘。取1~2 滴水解液于白瓷板上,加1滴碘-*溶液,檢查水解是否*。如已水解*,則不顯藍(lán)色。待三角瓶中的水解液冷卻后,加入一滴*指示劑,以6NNaOH中和至微紅,過濾,再用少量蒸餾水沖洗三角瓶及濾紙,將濾液全部收集在100ml的容量瓶中,用蒸餾水定容至刻度,混勻。吸取10ml定容過的水解液,移至另一100ml的容量瓶中,定容,混勻,作為總糖待測液。

(3)顯色和比色:

取5支25ml刻度的血糖或刻度試管,編號,按下表所示的量,加入待測液和試劑。


收起 
注意事項    

其他    
1、用*比大試管方便。

2、離心比過濾易得清液。

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測定應(yīng)同時進(jìn)行,一起顯色和比色

上海彩佑實(shí)業(yè)有限公司作者

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