細(xì)胞樣本的前處理

【資料簡(jiǎn)介】

一、勻漿介質(zhì)

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二、細(xì)胞樣本的前處理:

1、細(xì)胞沉淀的收集：

① 懸浮細(xì)胞: 對(duì)于懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞，直接通過離心收集細(xì)胞沉淀，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀。

② 貼壁細(xì)胞: 對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，用*將細(xì)胞消化下來，或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀。

我們一般建議客戶，細(xì)胞密度不要小于一百萬個(gè)/ml。

2、細(xì)胞沉淀的洗滌：

在細(xì)胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS （等滲）， 輕輕顛倒混勻，將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉淀。

重復(fù)上述操作反復(fù)洗滌1～2次。

3、勻漿的方式：手工勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,反復(fù)凍融。

① 手工勻漿：在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，用移液器將細(xì)胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動(dòng)勻漿3分鐘，然后取破碎好的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行測(cè)定。

② 超聲破碎:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進(jìn)行如下操作:

     a、用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎，也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復(fù)3～5次。

      b、用超聲細(xì)胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復(fù)4～5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的，或者說作用力量強(qiáng)弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑，zui厲害，基本可以把細(xì)胞*破掉，DNA會(huì)釋放出來，裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對(duì)核膜破壞的作用弱，結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40，也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一，在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用（SDS基本會(huì)使蛋白變性失活）。

去垢劑屬性只是一方面，buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guān)鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對(duì)酶活力的測(cè)定有一定的影響,一般不*用裂解液進(jìn)行裂解。

④ 反復(fù)凍融:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測(cè)指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，反復(fù)3次左右）。

                由于反復(fù)凍融對(duì)酶活力影響較大,一般不*使用

產(chǎn)品：

吳茱萸次堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:84-26-4對(duì)照品

20(s)-原人參三醇標(biāo)準(zhǔn)品,cas:34080-08-5對(duì)照品

鹽酸*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

蛇床子對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

白果內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

馬鞭草標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

CAS:98243-57-3,湖貝甲素標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

CAS:25956-17-6,誘惑紅標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

葶藶子(播娘蒿)標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

去甲蟛蜞菊內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品,cas:6468-55-9對(duì)照品

噻草隆標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:1929-88-0

CAS:486-66-8,大豆苷元標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

阿里紅標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

甲基丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)品,cas:93-15-2對(duì)照品

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

染料木苷標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

CAS:25127-29-1,克班寧標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

東莨菪內(nèi)酯對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

鹽酸水蘇堿對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

CAS:1491-41-4,驅(qū)蟲膦標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

肉葉蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:442-51-3對(duì)照品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

茵陳(濱蒿)對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

巖藻甾醇標(biāo)準(zhǔn)品,cas:17605-67-3對(duì)照品

*雜質(zhì)對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

蛇床子素對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品,cas:327-97-9對(duì)照品

滿山白對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

CAS:522-97-4,四氫小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

6-姜辣素對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

6-巰基嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

CAS:75239-63-3,麥冬二氫高異黃酮A標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

去亞甲基小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:25459-91-0對(duì)照品

蟲螨磷標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:60238-56-4

CAS:15862-07-4,2,4,5-三氯聯(lián)苯標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

土荊芥標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

7-乙基-10-羥基*標(biāo)準(zhǔn)品,cas:86639-52-3對(duì)照品

黃柏堿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

烏賊墨標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

滅草呋喃標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:26225-79-6

吡嘧磺隆標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:98389-04-9

*混合物對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

CAS:78763-58-3,去芹糖桔梗皂苷 D標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

乙羧氟草醚標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:77501-90-7

5-｛4-［2-（5-乙基-2-吡啶基）乙氧基］苯基亞甲基｝-2，4-噻唑二酮(鹽酸*雜質(zhì))對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

石見穿標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

CAS:84954-92-7,洛塞維標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

CAS:52756-25-9,麥草氟甲酯標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

苯并(b)熒蒽標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:205-99-2

三白草酮對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

桑皮苷C標(biāo)準(zhǔn)品,cas:102841-43-0對(duì)照品

香薷對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

白果內(nèi)酯對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

雙氯*標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:343-55-5

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

CAS:34681-10-2,丁酮威標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

鎵標(biāo)準(zhǔn)溶液,cas:7440-55-3

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

鹽酸吐根酚堿標(biāo)準(zhǔn)品,cas:5853-29-2對(duì)照品

*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

鹽酸*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

滇桂艾納香標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

磷酸根標(biāo)準(zhǔn)溶液

CAS:68786-66-3,三氯苯達(dá)唑標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

耐斯糖對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

十七碳酸甲酯對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

反式－九氯標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:39765-80-5

間氨基酚標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

菜薊苦素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:35730-78-0對(duì)照品

3,4-二甲酚標(biāo)準(zhǔn)溶液,cas:95-65-8

*E標(biāo)準(zhǔn)品,cas:18444-66-1對(duì)照品

土荊皮乙酸對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

CAS:127191-86-0,馬兜鈴內(nèi)酰胺 A標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

白術(shù)對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

(K,Na)多元素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（混標(biāo)）標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

CAS:124961-61-1,多被銀蓮花皂苷R8標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

L-*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

異澤蘭黃素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:22368-21-4對(duì)照品

亞硫酸氫鈉甲萘醌標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品,cas:130-37-0

阿洛西林對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

*對(duì)照品/標(biāo)準(zhǔn)品

芥子苷單水合物標(biāo)準(zhǔn)品,cas:64550-88-5對(duì)照品

槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品,cas:6151-25-3對(duì)照品

炔草酯標(biāo)準(zhǔn)品|對(duì)照品

CAS:93675-88-8,連翹酯苷E標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品

CAS:144-80-9,*標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品價(jià)格

香蜂草苷標(biāo)準(zhǔn)品,cas:14259-47-3對(duì)照品