土壤酸性磷酸酶S-ACP?活性測(cè)定試劑盒

【資料簡(jiǎn)介】

土壤酸性磷酸酶?soil acid phosphatase?S-ACP?活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書 
                                                                        分光光度法    50 管/48 樣 
測(cè)定意義?                                                       
土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷礦化的酶?其活性的高?直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解
轉(zhuǎn)化及其生物有效性?是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向о強(qiáng)度的指標(biāo)?土壤磷酸酶?到土壤碳?
氮含??有效磷含?和 pH 顯著影響?根據(jù)zui適 pH 范圍?通常分為酸性?中性和堿性й種
類型? 
測(cè)定原理? 
酸性環(huán)境中?S-ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉?通過(guò)測(cè)定酚的生成?即
??算出 S-ACP 活性? 
自備儀器和用品? 
?見分光光度???式離心機(jī)?37℃恒溫培養(yǎng)箱?分析天???調(diào)式移液器?1mL 玻璃比
色皿?冰?蒸餾水?乙醇和甲苯? 
試劑組成和配制? 
試劑一?液體×1 瓶?4℃避光保存? 
試劑二?粉劑×1 瓶?4℃保存?用前加 50mL蒸餾水充分溶解? 
試劑й?液體×1 瓶?4℃保存? 
試劑四?粉劑×1 瓶?4℃避光保存?臨用前加 1152µL無(wú)水乙醇?自備? ?48 µL蒸餾水充分
溶解? ??褐色后н能再使用? 
標(biāo)準(zhǔn)品?液體×1 瓶?0.5 µmol/mL苯酚標(biāo)準(zhǔn)液?4℃保存? 
粗酶液提?? 
??風(fēng)?混勻土壤約 0.1g?加入 0.05mL甲苯?自備? ?輕搖 15min?加 0.4  mL試劑一并且
搖勻后?置于 37℃恒溫培養(yǎng)箱?開始?時(shí)?催化反應(yīng) 24h?到時(shí)后迅速加入 1mL 試劑二充
分混勻?以終止酶催化的反應(yīng)?10000rpm室溫離心10min??к清液置于冰к待測(cè)? 
土壤酸性磷酸酶?soil acid phosphatase?S-ACP?活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書 測(cè)定步驟? 
1.  分光光度?預(yù)熱 30 min 以к?調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm?蒸餾水調(diào)零? 
2.  空白管?? 1mL玻璃比色皿?加入 50 µL 蒸餾水?100 µL試劑й?20 µL試劑四?充分
混勻?顯色后再加蒸餾水830 µL?混勻后室溫靜置 30 min?于 660 nm測(cè)定吸光度?記為A
空白管? 
3.  標(biāo)準(zhǔn)管?? 1mL玻璃比色皿?加入 50 µL 標(biāo)準(zhǔn)液?100 µL試劑й?20 µL試劑四?充分
混勻?顯色后再加蒸餾水830 µL?混勻后室溫靜置 30 min?于 660 nm測(cè)定吸光度?記為A
標(biāo)準(zhǔn)管? 
4.  測(cè)定管?? 1mL玻璃比色皿?加入 50 µL к清液?100 µL試劑й?20 µL試劑四?充分
混勻?顯色后再加蒸餾水830 µL?混勻后室溫靜置 30 min?于 660 nm測(cè)定吸光度?記為A
測(cè)定管? 
土壤酸性磷酸酶?soil acid phosphatase?S-ACP?活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書 S-ACP 活性?算? 
活性單?定義?37℃中?克土壤?天釋放 1µmol酚? 
S-ACP?U/g?=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A測(cè)定管ˉA空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管ˉA 空白管)]×V總÷W÷T   
=0.725×(A測(cè)定管ˉA空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管ˉA空白管)÷W 
C 標(biāo)準(zhǔn)液?0.5  µ  mol/mL?  V 總?催化體系總體??1.45mL?W?土壤樣品質(zhì)??g?T?