促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟

【資料簡介】

促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟【成份】

［藥盒組成及配制］ 50管 100管 200管

1.碘[¹²⁵I]-LH(紅) 1瓶 1瓶 2瓶

2.LH校準品 1套 1套 1套

LH校準品(7瓶/套)濃度分別為：(0、5、10、25、50、100、200)mIU/mL。

3.LH抗體(蘭) 1瓶 1瓶 2瓶

4.質(zhì)量控制樣品 1套 1套 1套

5.分離試劑 1瓶 1瓶 2瓶

6.藥盒使用說明書 1張 1張 1張

促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟［操作方法］

1.樣品采集：取全血，分離血清，備用。(2～8)℃放置可保存2周；若冰凍保存，可放置五周。脂血或溶血樣品影響測定結(jié)果。

2.實驗方法：試管編號，按下表程序操作。

操作表 單位：μL

管別	校準品	樣品	蒸餾水	抗體	125I-LH	混勻，室溫放置(12～16)小時。	分離劑
總T管	--	--	--	--	100		--
NSB管	200(S0)	--	100	--	100		500
S0管	100	--	--	100	100		500
S1管～S末管	100	--	--	100	100		500
血樣品管	--	100	--	100	100		500

混勻，室溫放置15分鐘，離心(3500轉(zhuǎn)/分)15分鐘，吸棄上清液，在放免儀上測定各管沉淀的放射性計數(shù)(cpm)。

［數(shù)據(jù)處理］

1.計算機處理：建議采用“對數(shù)計量-相對結(jié)合率的分數(shù)對數(shù)”〔log(dose)～logit(B_i/B₀)〕數(shù)學模型或四參數(shù)數(shù)學模型擬合。

2.計算、繪圖法：

計算各管的百分結(jié)合率：以S₀(cpm數(shù))為B₀，各校準管S_i(cpm數(shù))為B_i，求各管的百分結(jié)合率。

 

⑴.線性回歸：用logX～logitY回歸，求出r、a、b值，樣品含量可由下式計算得出。

 

⑵.繪圖法：用各校準點計算的結(jié)果，在log～logit坐標紙上繪制校準曲線圖，被測樣品的含量可根據(jù)B_i/B₀的百分結(jié)合率從校準曲線圖上查出。

［正常參考值］

各實驗室應(yīng)根據(jù)實驗?zāi)Ｐ?/span>建立自己的動物參考值。

［技術(shù)特性］

1.靈敏度：＜0.3mIU/mL

2.測定范圍：(5～200)mIU/mL

3.精密性：批內(nèi)變異系數(shù)CVw＜10％，批間變異系數(shù)CVb＜15％。

［參考文獻］

1.Bremnerw J:PituifaryPonadotropinsans their dosorders,Principles of endocinodosy and metabolism KL 1990,pp152-6.

2.Wu CH:Monitoring of oradation induction Fertilsteril 30:617,1978.

【性狀】

液體組份應(yīng)澄清，無沉淀或絮狀物。

【放射性核素半衰期】

放射性核素碘[¹²⁵I]半衰期(T_1/2)=60天

促黃體生成激素放免試劑盒操作步驟【適應(yīng)癥】

［測定原理］

本藥盒是利用放射免疫分析方法進行測定的。在均相競爭抑制反應(yīng)中采用平衡法，對血清樣品中LH的含量進行直接測定。測定中校準品、樣品等中的LH與¹²⁵I-LH競爭*的LH抗體結(jié)合位。當被測樣品中LH的含量高時，剩余的抗體結(jié)合位就少，從而與抗體結(jié)合的¹²⁵I-LH就少，反之亦然。利用分離試劑分離出抗原-抗體復(fù)合物，并測定復(fù)合物中的放射性計數(shù)。¹²⁵I-LH的結(jié)合量與樣品中LH的含量呈函數(shù)關(guān)系，通過數(shù)據(jù)處理可求出樣品中LH的含量。

［臨床意義］

促黃體生長激素(LH）是由垂體前葉分泌的糖蛋白激素，其分子量大約為30000，由兩條多肽鏈（即α和β亞單位）組成。LH的α亞單位與FSH、LH和HCG的亞單位的結(jié)構(gòu)相似。β亞單位在上述激素之間是不同的，從而賦予各激素各自的生物及免疫學特性。在雌性體中，LH在卵泡期限與FSH一起促進卵泡的成熟、雌性激素的合成和分泌；促進排卵和使排卵后的卵泡轉(zhuǎn)變?yōu)辄S體；促進間質(zhì)的生長；并促進黃體合成和孕激素與雌性激素的分泌。雄性LH促進睪丸間質(zhì)細胞增生，促進其合成和分泌睪丸酮。由于LH和FSH的作用是互相協(xié)同的故二者常同時測定。LH增高見于Klinefelter綜合癥、Turner綜合癥、性腺切除后及促性腺激素產(chǎn)生腫瘤；減低見于西蒙氏病、席漢氏綜合癥、肥胖性生殖器退化綜合癥、垂體性侏儒、睪丸腫瘤、卵巢腫瘤、神經(jīng)性厭食及使用雌激素后。

 

【注意事項】

1.所有試劑包括待測樣品實驗前應(yīng)事先在室溫下平衡20分鐘，且使用前應(yīng)充分搖勻。

2.不同批試劑不能混合使用，每份樣品都應(yīng)做雙管實驗。

3.本實驗使用放射性核素碘[¹²⁵I](劑量為0.2μCi/mL)，故應(yīng)注意放射防護。放射性廢物須按放射防護條例規(guī)定處理。

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