小鼠（CytC）ELISA試劑盒使用說明書

【資料簡介】

小鼠（CytC）ELISA試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中細胞色素 C（CytC）含。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠細胞色素 C（CytC）水平。用純化的小鼠細 胞色素 C（CytC）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細胞色素 C（CytC），再與 HRP 標記的細胞色素 C（CytC）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合 物，過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作 用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細胞色素 C（CytC）呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠細胞色素 C（CytC）濃
度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（200nmol/L） 0.5ml×1 瓶 3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融 2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
100nmol/L 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
50nmol/L 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 25nmol/L 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
12.5nmol/L 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
6.25nmol/L 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl， 然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用 5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。 6. 加酶：孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。 7. 溫育：操作同 3。 8. 洗滌：操作同 5。 9. 顯色：孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。 11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。
操作程序總結：
小鼠（CytC）ELISA試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3．各步加樣均應使用加樣器，并常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內，如標本數(shù)多，使用排槍加樣。 4． 請次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含過高（樣本 OD 值 大于標準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物請避光保存。 7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9．本試劑不同批號組分不得混用。
小鼠（CytC）ELISA試劑盒保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 個月