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主要用途

純化核糖體（ribosome）蛋白質(zhì)萃取試劑是一種旨在通過(guò)化學(xué)和有機(jī)溶劑處理，去除RNA成分，獲得完整而純化的核糖體蛋白系統(tǒng)的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種純化核糖體（動(dòng)物、人體、植物、細(xì)菌等）的蛋白質(zhì)預(yù)制備。可直接用于特定蛋白后續(xù)純化、蛋白一維或二維電泳、西方雜交、免疫抗體和質(zhì)譜分析等等。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

核糖體（ribosome）是一種細(xì)小顆粒的核糖蛋白復(fù)合物（ribonucleoprotein complex），生命細(xì)胞制造蛋白質(zhì)的非膜性結(jié)構(gòu)元素和轉(zhuǎn)譯裝置（translational apparatus），由RNA和蛋白質(zhì)組成，具有多肽轉(zhuǎn)移酶的活性。其分成2個(gè)亞體：大亞體和小亞體。核糖體通過(guò)大亞體結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)核糖體（tRNA），而小亞體結(jié)合信使RNA（mRNA），然后閱讀RNA提供的信息，轉(zhuǎn)譯（translation）成氨基酸，連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞質(zhì)（游離核糖體）、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體，由40S小亞體和60S大亞體組成：60S由5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個(gè)蛋白組成；而40S由18S RNA和33個(gè)蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似，為70S核糖體，由30S小亞體和50S大亞體組成：50S包括5S、23S RNA和34個(gè)蛋白；30S包括16S RNA和21個(gè)蛋白。

產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）                毫升

清理液（Reagent B）            毫升

沉淀液（Reagent C）            毫升

萃取液（Reagent D）            毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；試劑具有腐蝕性和揮發(fā)性，注意操作安全和密閉瓶蓋；有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

渦旋震蕩儀：用于混勻

實(shí)驗(yàn)步驟

1． 從－70℃冰箱里取出核糖體顆粒樣品，放進(jìn)冰槽里

2． （選擇步驟）如果核糖體樣品不是顆粒狀態(tài)，使用適量的緩沖液（Reagent A），調(diào)整到1毫升體系

3． （選擇步驟）加入xx微升清理液（Reagent B），混勻

4． （選擇步驟）放進(jìn)4℃（微型）臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g

5． （選擇步驟）小心抽去上清液

6． 加入xx微升緩沖液（Reagent A）到核糖體顆粒樣品中，混勻顆粒群

7． 加入xx微升沉淀液（Reagent C），混勻

8． 放進(jìn)冰槽中孵育60分鐘，期間每隔15分鐘渦旋震蕩60秒

9． 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

10． 小心移取800微升上清液到新的15毫升錐形離心管

11． 加入xx毫升萃取液（Reagent D），混勻

12． 放進(jìn)—20℃冰箱里，孵育2小時(shí)

13． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g

14． 小心抽去上清液

15． 加入xx毫升萃取液（Reagent D）

16． 放進(jìn)－20℃冰箱里過(guò)夜

17． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g

18． 小心抽去上清液

19． 加入xx毫升清理液（Reagent B）

20． 放進(jìn)－20℃冰箱里孵育30分鐘

21． 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g

22． 小心抽去上清液

23． 空氣中揮干

24． 若暫時(shí)不予后續(xù)處理，保存在－20℃冰箱里

25． 或繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)操作，例如電泳，質(zhì)譜等

注意事項(xiàng)

1． 本產(chǎn)品為20次操作

2． 操作時(shí)，須戴手套

3． 試劑具有腐蝕性和揮發(fā)性，注意操作安全和密閉瓶蓋

4． 推薦使用系列核糖體分離試劑盒提取核糖體

5． 本公司提供系列核糖體試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定

2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無(wú)蛋白酶污染

3． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定蛋白萃取產(chǎn)量高

4． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純化程度高