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酶聯(lián)免疫法
2013-8-30 閱讀(987)
酶聯(lián)免疫法是什么？
酶聯(lián)免疫法吸附是一個重要的，高通量取代了低級通量的補體結合，在20世紀80年代作為主要檢測血凝抑制免疫測定。在ELISA中，組織樣品（如尿，特別是血清）檢測，以檢測抗體的存在?？贵w的存在表明該范例的源已暴露在抗原，即，一經(jīng)曝光，通常是收集的蛋白誘導的免疫應答的物質。抗體作為抗原的指紋，間接的診斷醫(yī)師指示其在宿主中的存在。因此，在ELISA免疫測定法是一種間接的。幾種其他間接免疫測定法也是常用的，特別是間接熒光抗體試驗，或IFA 。
酶聯(lián)免疫法通常通過結合抗原的ELISA在固體表面上，然后加入組織樣品，二次抗體，記者標簽，洗滌步驟之間。在組織中的抗體將結合到抗原和抗體（或其他抗原，如果它是一個夾心法） 。二次抗體結合的標簽，熒光。洗滌后，將*的熒光抗體，因為它們將錨定的抗原，這勢必會在固體表面，也被稱為固相的第二抗體和標簽。雖然ELISA可用于演示的藥代動力學或荷爾蒙的影響，它的主要用途是在診斷，在這種能力，它檢測傳染性病原體，包括病毒，細菌，真菌，原生動物和寄生蟲所表達的抗原的抗體。zui常見的用途是在人類的ELISA檢測血清樣品中的HIV-1 。的ELISA方法也可用于許多不同的動物物種。這種書面記錄，我將集中討論的ELISA血清中檢測傳染性病原體的能力。
過程
在開始測試之前....幾件事情必須完成。首先，抗原必須傳播。通常有兩種類型的抗原：常規(guī)和重組。傳統(tǒng)的抗原制備接種傳染性病原體種子的傳染性病原體樣本已檢測質量控制和可能準備其次，就是一臺主機或一個組織的文化。接種主機或培養(yǎng)物和靶組織或收獲后提取孵化。重組抗原的制備是通過首先回顧傳染性病原體的基因組隔離感興趣的基因（ GOI ）編碼抗原。所述GOI然后拼接到載體中，并接種到宿主中或培養(yǎng)。重組抗原有幾個優(yōu)點，即額外的純度和傳染性病原體的工作的人的安全。一種無害的載體，包含了埃博拉病毒抗原，然后一起工作現(xiàn)場埃博拉病毒，畢竟這是比較容易的工作。收獲后，抗原純化不同的治療方法，去除細胞碎片或其他外來物質，并測定效價和純度。
其次，如果要使用陽性和陰性對照血清，他們必須做好準備，前者通過與傳染性病原體和感染宿主提取免疫血清;后者使用非免疫血清。正面和字段的字段陰性血清，是已知的血清樣品，以從歷史數(shù)據(jù)是正或負，也可以使用。
zui后，被涂覆到所述固相上的抗原必須。通常情況下，使用96孔微量滴定板?？乖贤坎及?。此外，組織控制，可涂。用于傳播抗原主機或組織培養(yǎng)的那種組織控制是一個未感染的樣本。重組抗原，這可能僅僅是一種載體，其中印尼政府拼接。
測試
從倉庫中提取的抗原和組織控制涂層鋼板。對照血清，血清樣本，包括預先稀釋到板分配。然后將所述板孵育一定量的時間，并洗滌。
*次溫育和洗滌后，第二抗體被分配到板，板溫育，并再次洗滌。二次抗體，也稱為共軛，也可能包括辣根過氧化物酶conjuagted的抗免疫球蛋白（Ig ） ，并結合物種的血清。
第二次溫育和洗滌后，標簽被分配到板，板溫育，并再次洗滌。有不同類型的標簽：一些熒光，其它的是放射性的。
第三孵化和洗滌之后，該板塊被讀取，這可能是手工完成，主觀量化，或通過一個閱讀器，這將產(chǎn)生客觀的定量結果。對數(shù)據(jù)進行標準化。通常情況下，血清中含有不同的逆轉錄病毒，可能會在一些小的方式是否是存在于血清樣品中的抗體與抗原反應。被稱為熒光由于這個背景，或簡單的“噪聲” ，而不是“信號” ，抗原得分。解決此問題通常是減去抗原得分的組織控制分數(shù)線?？刂茢?shù)據(jù)或歷史數(shù)據(jù)的基礎上，然后，將樣品符合任一免疫（正）或傳染性病原體的非免疫（負） 。
討論
在ELISA中所概述的免疫測定法的書面記錄的相當大的優(yōu)勢，即：高通量處理，特異度，數(shù)據(jù)的可靠性。這些特異性也是很大的弱點：每口井只能有一種類型的抗原或組織控制。在大型試驗設施，通常涂板交替行一個antigne ，其組織控制。十分不利的是，用于執(zhí)行對一組病毒的血清，需要一種類型的板，每種抗原。因此，對三種抗原檢查一個樣本需要三大板塊，它可以是一個巨大的時間和金錢的浪費。zui后，雖然在測試本身是便宜的，抗原，組織控制，血清，和其他試劑的生產(chǎn)，如果在內部完成，是相當可觀的。下一代的免疫測定法將未來的懸浮微陣列測試，這將允許一個以上的不同的抗原或組織控制在一個良好。
