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上海哈靈生物科技有限公司
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解讀：斐林試劑如何用比色法測(cè)還原糖，步驟是什么?
2013-9-2 閱讀(5450)
斐林試劑來(lái)源
斐林試劑是德國(guó)化學(xué)家斐林（赫爾曼von斐林，1812——1885）在1849發(fā)明的。它是用氫氧化鈉和硫酸銅溶液0.1克/毫升0.05克/毫升的含量和濃度，酒石酸鉀鈉制備的內(nèi)容，其實(shí)質(zhì)是一種新的氫氧化銅的制備。還原糖和可溶性（葡萄糖，果糖和麥芽糖）加熱的條件下，能產(chǎn)生磚紅色氧化亞銅沉淀。因此，林中常用的可溶性還原糖的存在與否，鑒定試劑。注：嚴(yán)格來(lái)講，果糖不醛糖，不應(yīng)降低，但果糖是非常特殊的，能反映還原（高中化學(xué)，果糖不減，嚴(yán)格地說(shuō)是錯(cuò)的）。
斐林試劑檢測(cè)還原糖步驟
1.規(guī)范曲線(xiàn)的制：各管混合后加塞，于沸水浴中加熱15min。取出后自來(lái)水冷卻，1500rpm離心15min。取上清液，用分光光度計(jì)在590nm波長(zhǎng)下比色，以蒸餾水作對(duì)照，讀取吸光度用空白管的吸光度與不一樣濃度糖的各管的吸光度之差為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的糖含量為縱坐標(biāo)，制作規(guī)范曲線(xiàn)。
2.樣品中還原糖的獲?。喝⌒迈r的植物樣品洗凈、擦干、剪碎，稱(chēng)取10.00g，放入研缽中研磨至糊狀，用水洗入250ml容量瓶中。當(dāng)體積近150ml左右時(shí)，加2～3滴甲基紅指示劑，如呈赤色，可用0.1mol/L 的NaOH中和至微黃色。若用風(fēng)干樣品，可稱(chēng)取干粉3.00g，先在燒杯頂用少數(shù)水濕潤(rùn)，然后用水洗入250ml容量瓶中，如顯酸性，可用上法中和。將容量瓶置于80℃的恒溫水浴中保溫30min，其間搖擺數(shù)次，以便將還原糖充沛獲取出來(lái)。對(duì)含蛋白質(zhì)較多的樣品，此間可加10％Pb（Ac）2，除掉蛋白質(zhì)，至不再發(fā)生白色絮狀沉積時(shí)，加飽滿(mǎn)Na2SO4除掉剩余的鉛離子。30min后取出冷卻，定容至刻度，搖勻后過(guò)濾待測(cè)。
3. 樣品測(cè)定：汲取6ml待測(cè)液，加4ml斐林試劑，其它操作與規(guī)范曲線(xiàn)一樣，在590nm波長(zhǎng)下讀取吸光度。以不含樣品的空白管的吸光度減去樣品管的吸光度，在規(guī)范曲線(xiàn)上查出糖含量.
比色法是什么?
以生成有色化合物的顯色反響為根底，經(jīng)過(guò)對(duì)比或丈量有色物質(zhì)溶液色彩深度來(lái)斷定待測(cè)組分含量的辦法。比色法作為一種定量剖析的辦法，開(kāi)始于19世紀(jì)30～40年代。比色剖析對(duì)顯色反響的基本要求是：反響應(yīng)具有較高的靈敏度和挑選性，反響生成的有色化合物的組成安穩(wěn)且較安穩(wěn)，它和顯色劑的色彩不同較大。挑選恰當(dāng)?shù)娘@色反響和操控好適合的反響條件，是比色剖析的要害。
