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抗體/蛋白HRP標記制備試劑盒產(chǎn)品說明書

主要用途

抗體/蛋白HRP標記制備試劑是一種旨在通過高碘酸氧化產(chǎn)生活化的辣根過氧化酶，與抗體或蛋白中氨基偶聯(lián)反應，進一步還原和中和作用，確保復合體的穩(wěn)定的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種種系的抗體、純化蛋白的HRP標記。其應用于后續(xù)WESTERN BLOT、免疫組化、ELISA等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，反應敏感，重復性好。

技術(shù)背景

辣根過氧化酶，分子量44Kd，常作為標記，用于免疫反應的定量檢測（enzyme immunoassay；EIA），例如免疫印跡WESTERN BLOT、免疫檢測ELISA和免疫化學染色immunohistochemical staining等。辣根過氧化酶具有價廉、高純、高特異活性、穩(wěn)定等優(yōu)點，成為主要的（占80％）抗體或蛋白綴和標記酶。基于辣根過氧化酶為糖蛋白，含有8個糖鏈，通過高碘酸避光氧化，使羥基和醛基分離后，活化的HRP既不失活，又能在堿性條件下，與所有蛋白或抗體存在的氨基進行偶聯(lián)反應，形成席夫堿（Schiff's bases），進而在酸性透析處理后去除剩余的高碘酸和預防自偶聯(lián)。經(jīng)過溫和的硼氫化氰鈉（sodium cyanoborohydride）還原水合作用，以及乙醇胺（ethanolamine）或2-巰基乙胺 （2-mercaptoethylamine）中和殘余的醛基，使標記蛋白/抗體更加穩(wěn)定。  

產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）   1毫升

標記液（Reagent B）       50微升

還原液（Reagent C）      200微升

中和液（Reagent D）  50微升

保存液（Reagent E）   1毫升

產(chǎn)品說明書       1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

目標抗體或蛋白：用于HRP標記

1.5毫升離心管：用于樣品反應操作和保存的容器

震蕩器：用于混勻反應物

實驗步驟

• 移取10微升（總量100微克）用戶自備的目標抗體或蛋白（分子量在160Kd左右或以下）
• 加入90微升緩沖液（Reagent A），混勻
• 加入10微升標記液（Reagent B），混勻
• 室溫下（25℃）孵育1小時或4℃冰箱里孵育16小時
• 加入10微升還原液（Reagent C），混勻
• 室溫下孵育15分鐘
• 加入10微升中和液（Reagent D），混勻
• 室溫下孵育15分鐘
• 加入130微升保存液（Reagent E），混勻
• 獲得標記蛋白或抗體終濃度0.6毫克/毫升
• 即刻放進-70℃保存或置于冰槽里備用
• 或繼續(xù)后續(xù)ELISA、WESTERN BLOT、IMMUNOHISTOLOGY等

注意事項

• 本產(chǎn)品為5次（100微克/次）操作
• 操作時，須戴手套
• 樣品中避免含有*（sodium azide）、Tris、甘氨酸（glycine）、氫氧化銨（NH4OH）等，否則干擾標記
• 如果標記液（Reagent B）沒有充分溶解，可以放在4℃冰箱里72小時或更長時間后使用
• 如果需要增加標記量，則相應增加試劑用量
• 如果標記500Kd以上的蛋白或抗體，則使用20微升標記液（Reagent B）即可
• 標記效率取決于目標蛋白或抗體與活化HRP的分子摩爾濃度比例和結(jié)構(gòu)關(guān)系
• HRP標記蛋白復合體在4℃溫度下保持4周穩(wěn)定；在－20℃溫度下，保持6個月穩(wěn)定
• 標記抗體后續(xù)應用建議用量如下：

• 本公司提供系列蛋白/抗體標記試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶