從海水中如何分離一種噬菌體？這是一道以前的研究生考題,希望大家help me！

I hope this could solve your problem：Marine phage genomics.pdf(345.3k)

噬菌體的鑒定

1 樣品采集

將一定的樣品放入滅菌三角瓶中，加入對數(shù)生長期的敏感指示菌如大腸桿菌菌液3～5mL，再加20mL二倍肉湯蛋白胨培養(yǎng)液。

2 增殖培養(yǎng)

30℃振蕩培養(yǎng)12～18h, 使噬菌體增殖。

3 離心分離

將上述培養(yǎng)液以3000rpm離心15～20min，取上清液，用pH7.0，1%蛋白胨水稀釋至10-2～10-3，用于噬菌體檢查及效價測定。

4 生物測定法

4.1雙層瓊脂平板法

4.1.1 倒下層瓊脂 
融化下層培養(yǎng)基，倒平板（約10mL/皿）待用。

4.1.2倒上層瓊脂

融化上層培養(yǎng)基，待融化的上層培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，每管中加入敏感指示菌 (大腸桿菌) 菌液0.2mL，待檢樣品液或上述噬菌體增殖液0.2～0.5mL，混合后立即倒入上層平板鋪平。

4.1.3恒溫培養(yǎng)

30℃恒溫培養(yǎng)6～12h觀察結(jié)果。

4.1.4 觀察結(jié)果

如有噬菌體，則在雙層培養(yǎng)基的上層出現(xiàn)透亮無菌圓形空斑──噬菌斑。

4.2 單層瓊脂平板法

省略下層培養(yǎng)基，將上層培養(yǎng)基的瓊脂量增加至2%，融化后冷卻至45℃左右，如同上法加入指示菌和檢樣，混合后迅速倒平板。30℃恒溫培養(yǎng)6～16h后觀察結(jié)果。

4.3離心分離加熱法（快速檢查）

取大腸桿菌正常培養(yǎng)液和侵染有噬菌體的異常大腸桿菌培養(yǎng)液，4000rpm離心20min，分別取兩組發(fā)酵液的上清液(A1)，一部分于721分光光度計上測定OD650光密度值，另外各取5mL上清液于試管中，置水浴中煮沸2min（A2），檢測A2溶液OD650光密度值，記錄結(jié)果。上海友騰生物傾力為客戶提供上萬種科研試劑，提供*、zui全、zui有效的科研試劑產(chǎn)品，質(zhì)量被全國各大院?？蒲袡C(jī)構(gòu)認(rèn)可。
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