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為什么神經(jīng)干細(xì)胞要懸浮培養(yǎng)?
神經(jīng)干細(xì)胞和其他干細(xì)胞一樣,在體內(nèi)也是和周圍細(xì)胞及基質(zhì)黏附在一起的,這樣看來,它應(yīng)該是貼壁生長的。但為什么我們要懸浮培養(yǎng)呢?是為了抑制其分化?那為什么懸浮的時(shí)候它不容易分化,而貼壁反而容易分化呢?
另外,既然神經(jīng)干細(xì)胞在體內(nèi)黏附生長,那么在體外懸浮培養(yǎng)為什么不會(huì)死亡呢(其他的細(xì)胞基本都會(huì)死亡)?據(jù)我所知,能夠懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞主要是(造)血細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞,而血細(xì)胞在體內(nèi)就是懸浮的,這可以理解,但神經(jīng)干細(xì)胞在體內(nèi)卻不是這樣的。
據(jù)此,我認(rèn)為,神經(jīng)干細(xì)胞在體外貼壁生長更符合其在體內(nèi)的情況,能更好地抑制其分化。當(dāng)然這需要我們找到一種更好的培養(yǎng)底物。
請結(jié)合 Gage FH: Mammalian neural stem cells. Science 2000,287:1433-1438.
Reynolds, B. A. & Rietze, R. L. Neural stem cells and neurospheres — re-evaluating the relationship. Nature Methods 2, 333–336 (2005)兩篇綜述。
*篇參考文文獻(xiàn)雖然是2000年的,但是大牛Gage對體外、體內(nèi)移植和內(nèi)源的神經(jīng)干細(xì)胞研究都做了非常富有邏輯性的討論,告訴我們什么才是神經(jīng)干細(xì)胞,其中的大部分觀點(diǎn)對目前的神經(jīng)干細(xì)胞研究還具有非常大的指導(dǎo)意義。
第二篇是神經(jīng)干細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的 Reynolds寫的,他用自己實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)說明了神經(jīng)球和神經(jīng)干細(xì)胞的關(guān)系,盡管神經(jīng)干細(xì)胞的存在可以用成球?qū)嶒?yàn)來檢測,但是能夠成球并不一定是干細(xì)胞。他用事實(shí)說明一個(gè)細(xì)胞能成球甚至二次三次成球也不能代表它就是神經(jīng)干細(xì)胞,在他的系統(tǒng)中,成球細(xì)胞的比例為2.4%而實(shí)際上干細(xì)胞的比例只有0.16%。
另外回答樓主為什么懸浮培養(yǎng)如此重要:
體外培養(yǎng)中,越原始的細(xì)胞的代謝要求越低,所以成熟的有功能細(xì)胞反而難以維持,培養(yǎng)干細(xì)胞首先要篩選出干細(xì)胞,而神經(jīng)干細(xì)胞和前體細(xì)胞只要給予一定的因子刺激就能在無血清培養(yǎng)基中增殖,而大多數(shù)原代的成熟細(xì)胞不行。單層貼壁培養(yǎng)也有不少人嘗試,也是基于同樣的原則,但是方法上都不如懸浮來的成熟。
我覺得不是說神經(jīng)干細(xì)胞一定要懸浮培養(yǎng),而是神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),不經(jīng)過特殊處理,是不會(huì)貼壁生長的??赡苓@就是神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)特性,原因可能是其不會(huì)分泌黏附介質(zhì)。
樓主所說的神經(jīng)干細(xì)胞貼壁生長時(shí),我覺得此時(shí)已不是單純的神經(jīng)干細(xì)胞,而是有一部分已經(jīng)分化為了其它種類的細(xì)胞,而其它種類的細(xì)胞會(huì)分泌一些黏附介質(zhì),促使神經(jīng)球黏附生長。
所以說,如果需要單純的神經(jīng)干細(xì)胞,還是要懸浮培養(yǎng),如果需要研究其分化特性,就要使其貼壁生長了。
其實(shí),現(xiàn)在對于神經(jīng)干細(xì)胞的確切定義目前還是有些模糊的,像在國內(nèi)很多人對stem cell 和progenitor cell 好像統(tǒng)稱為干細(xì)胞,其實(shí)兩者在很多方面還是有差異的:增殖能力,細(xì)胞漿表達(dá)蛋白,膜受體蛋白,離子通道...
記得很久以前在干細(xì)胞討論版塊有個(gè)帖子中提到:干細(xì)胞要稱之為干細(xì)胞,還有一個(gè)zui關(guān)鍵的特點(diǎn)就是:體外擴(kuò)增后的細(xì)胞重新輸注體內(nèi)后,除了能分化為特定的神經(jīng)細(xì)胞外,還必須具有一定的可檢測的功能(好像是冷泉港實(shí)驗(yàn)室提出的這個(gè)觀點(diǎn))
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