對于剖析ELISA試劑盒實驗測定效果因素總結(jié)

血清是zui常用的ELISA標(biāo)本，血漿通?？梢暈榕c血清平等的標(biāo)本，ELISA試劑盒標(biāo)本致使的假陽性和假陰性成果主要是攪擾性物質(zhì)所構(gòu)成的，分為內(nèi)源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：

1． 內(nèi)源性物質(zhì)
普遍認(rèn)為大概40%的人血清標(biāo)本中富含非特異性攪擾物質(zhì)，能夠不一樣程度影響檢查成果。多見的攪擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原本身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig （s）抗體、穿插反響物質(zhì)和其它物質(zhì)等。

（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）能夠與ELISA體系中的捕獲抗體及酶符號二抗的FC段直接，然后致使假陽性。處理該狀況的方法是：①用F（ab）2代替完好的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG參加到標(biāo)本稀釋液中同樣有用）；③檢查抗原時，能夠用2-巰基乙醇等參加到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
（2）補體
ELISA體系中固相一抗和符號二抗過程中，抗體分子發(fā)作變構(gòu)，其FC段的補體C1q分子位點被露出出來，使C1q 能夠?qū)⒍哌B接起來，然后構(gòu)成假陽性。處理的方法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類血清中富含能與嚙齒類動物（如鼠等）Ig （s） 的天然嗜異性抗體，可將ELISA體系中一抗和二抗連接起來，也能構(gòu)成假陽性。處理的方法是：可在標(biāo)本稀釋液中參加過量的動物Ig （s） ，但參加量缺乏或亞類不一樣時無效。
（4）嗜靶抗原的本身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的本身抗體，ELISA試劑盒有時能與靶抗原構(gòu)成復(fù)合物，在ELISA方法中均可攪擾抗原抗體測定成果。為防止以上狀況呈現(xiàn)，處理的方法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。
（5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig （s） 抗體
臨床展開的用鼠源性CD3等單克隆抗體醫(yī)治，用放射性同位素符號鼠源性抗體的印象確診及靶向醫(yī)治等新技術(shù)，均有可能使這些患者體內(nèi)發(fā)生抗鼠抗體；別的，被鼠等嚙齒類動物咬傷的患者體內(nèi)也能夠發(fā)生抗鼠Ig （s） 抗體。這些患者ELISA測守時均可發(fā)生假陽性。處理的方法是：測定抗原時，在標(biāo)本中參加充足的正常鼠Ig （s） ，然后戰(zhàn)勝因為上述要素構(gòu)成的假陽性。
（6）穿插反響物質(zhì)
類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有穿插反響的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定成果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時，假如穿插抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時，也會呈現(xiàn)假陽性成果。
（7）標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對ELISA測定成果有攪擾效果。

2． ELISA試劑盒外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是因為用于ELISA測定的血標(biāo)本的收集、儲存不妥等要素所構(gòu)成的。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細菌污染、標(biāo)本儲存過久、標(biāo)本凝聚不全和采血管中增加物等影響。
（1）標(biāo)本溶血 
因為各種人為要素致使的標(biāo)本溶血，均可因紅細胞損壞溶解時釋放出很多具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為符號的ELISA測定中，會致使非特異性顯色，攪擾測定成果。為戰(zhàn)勝上述攪擾效果，標(biāo)本收集時有必要留意防止溶血。
（2）標(biāo)本受細菌污染 
因菌體中可能富含內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因而，被細菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定成果。
（3）標(biāo)本保留不妥
在冰箱中保留過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚組成多聚體、AFP可構(gòu)成二聚體，在間接法ELISA測定中會致使本底過深、乃至構(gòu)成假陽性；標(biāo)本放置時刻過長（如一天以上），有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可呈現(xiàn)假陰性。為戰(zhàn)勝上述攪擾，ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮收集；如不能當(dāng)即測定，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)有些濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔，不行激烈振動。
（4）標(biāo)本凝聚不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的狀況下，正常血液收集后1/2~2h開端凝結(jié)，18~24h*凝結(jié)。臨床查驗工作中，有時為了爭取時刻迅速檢查，常在血液還未開端凝結(jié)時即強行離心別離血清，此刻的血清中仍殘留有些纖維蛋白原，在ELISA測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的纖維蛋白塊，易構(gòu)成假陽性成果；這類狀況于次日復(fù)查時因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查成果變?yōu)殛幮?。為防止上述攪擾效果，處理的方法是血液標(biāo)本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清，或標(biāo)本收集時用帶別離膠的采血管或于采血管中參加恰當(dāng)?shù)拇倌齽?br />（5）標(biāo)本管中增加物質(zhì)的影響
抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性）及迅速別離血清的別離膠等均對ELISA測定有必定攪擾效果。
經(jīng)過以上的剖析和總結(jié)，ELISA試劑盒查驗ELISA測定中呈現(xiàn)假陽性或假陰性等錯誤的成果，掃除要素和操作要素，再有即是從標(biāo)本要素進行剖析，并應(yīng)采納相應(yīng)措施掃除攪擾，然后保證檢查成果的準(zhǔn)確性。