牛膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)ELISA試劑盒本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入待測(cè)物質(zhì)，再與HRP標(biāo)記的抗原抗體結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度。 
注意事項(xiàng)：牛膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)ELISA試劑盒標(biāo)本的處理：

（1）細(xì)胞培養(yǎng)上清液 根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測(cè)。推薦稀釋濃度是稀釋5倍。

（2）腦脊液 根據(jù)需要用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋樣品，然后按照說明書所述方法檢測(cè)。推薦稀釋濃度是5倍。

（3）血漿 ①用EDTA2K離心收集在真空血液收集管中的血液，5,000×g，15分鐘，4℃，分離血漿樣品，然后儲(chǔ)存在零下80℃直到使用。②用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)稀釋液5倍稀釋血漿以避免血漿中的干擾物質(zhì)影響檢測(cè)，按照說明書方法檢測(cè)。

分析原理：牛膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)ELISA試劑盒是基于標(biāo)準(zhǔn)的雙抗夾心酶聯(lián)免疫分析技術(shù)。將人腫瘤 壞死因子受體超家族成員B特異性抗體包被于96孔板中人腫瘤壞死因子受體超家族成員B的檢測(cè)抗體為生 物素標(biāo)記抗體試驗(yàn)樣品和生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體相繼加入到96孔中，然后洗滌平板。生物素-HRP加入96 孔中，未與生物素標(biāo)檢測(cè)抗體結(jié)合的，被洗滌緩沖液洗掉HRP的底物TMB可與HRP（辣根過氧化物酶）發(fā)生 酶促反應(yīng)。TMB被HRP催化后變成藍(lán)色物質(zhì)，在加入酸性終止液后變?yōu)辄S色。黃顏色的深淺與人腫瘤壞死因 子受體超家族成員B樣品被捕獲的量成正比。

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