兔子Caspase-3/CPP32  ELISA試劑盒

  FOR RESEARCH USE ONLY

Drug Names

Generic Name：兔子Caspase-3/CPP32  ELISA試劑盒

      This kit can be used for determination of serum, plasma and liquid samples Organization Content.

The experimental principle:

The product levels were measured in samples of the kit by double antibody sandwichmethod. The product with the purified antibody coated microtiter plate, made of solid phase antibody, to package is the product antigen monoclonal antibodies are then added to the micropores, the product and then with HRP labeled antibody binding, the formation of antibody - antigen - antibody complex enzyme label, after thorough washing with TMB chromogenic substrate. TMB in the HRP enzyme catalytic conversion into the blue, and in the action of acid into the final yellow. This product is positively related to the depth of color and in the samples. Instrument measured absorbance in the 450nm wavelength with ELISA (OD), the product concentration in the samples was calculated by standard curve.

Materials provided with the kit

Specimen requirements

• serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• plasma-use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
• cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.
• Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant.
• extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.
• Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active.

Assay procedure

1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution 50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separay. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 240ng/L,160ng/L ,80ng/L,40ng/L, 20ng/L)

2.add sample：Set blank wells separay (blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 40μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.

3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.

4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.

5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.

6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except  blank well. 

7.incubate：Operation with 3.

8.washing：Operation with 5.

9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃

兔子Caspase-3/CPP32  ELISA試劑盒10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).

11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.

Important notes

• The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes in the room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.
• washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolve when dilute . Washing does not affect the result.
• add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids the experimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .
• if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the first standard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
• Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.
• The substrate evade the light preservation.
• Please according to use instruction strictly, The test result determination must take the microtiter plate reader as a standard.
• All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective material process.
• Do not mix reagents with those from other lots.

Calculate：

Take the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.

Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

兔子Caspase-3/CPP32  ELISA試劑盒其它產(chǎn)品 左旋肉堿     L(-)-Carnitine     541-15-1    C7H15NO3    161.2    20mg
 正丁胺     Butylamine     109-73-9     C4H11N    73.14    50mg
      D-Alanine     338-69-2    C3H7NO2    89.09    20mg
L-苯    L-Phenylalanine    63-91-2     C9H11NO2     165.19    20mg
    Dacarbazine    4342/3/4    C6H10N6O    182.18    20mg
蛋氨酸    L-Methionine    63-68-3    C5H11NO2S    149.21    20mg
L-蛋氨酸    L-Methionine    63-68-3    C5H11NO2S    149.21    20mg
 腐胺     1,4-Diaminobutane     110-60-1     C4H12N2    88.15    20mg
L-谷氨酸    L-Glutamic acid    56-86-0    C5H9NO4    147.13    20mg
甘氨酸    Glycine    56-40-6    C2H5NO2    75.07    20mg
L-胱氨酸    L-Cystine    56-89-3    C6H12N2O4S2    240.3    20mg
L-谷胱甘肽    Glutathione    70-18-8    C20H32N6O12S2    612.63    20mg
L-谷氨酰胺    L-Glutamine    56-85-9    C5H10N2O3    146.14    20mg
L-精氨酸    L(+)-Arginine    74-79-3    C6H14N4O2    174.2    20mg
三環(huán)[3.3.1.13.7]癸烷;金鋼烷;三環(huán)[3.3.1.1]癸烷        281-23-2    C10H16    136.23    20mg
2-金剛烷酮    2-Adamantanone    700-58-3    C10H14O    150.22    20mg
三環(huán)[3.3.1.1(3,7)]癸烷-2-醇;2-金剛醇;2-2-金剛烷醇醇        700-57-2    C10H16O    152.23    20mg
雷帕霉素    Sirolimus    53123-88-9    C51H79NO13    914.18    20mg
他克莫司    Tacrolimus    104987-11-3    C44H69NO12    804.02    20mg
L-     L-Leucine    61-90-5    C6H13NO2    131.17    20mg
賴氨酸    L-Lysine    56-87-1    C6H14N2O2    146.19    20mg
L-酪氨酸    L-Tyrosine    60-18-4    C9H11NO3    181.19    20mg
馬來酸    Maleic acid    110-16-7     C4H4O4    116.07    20mg
尿素    Urea    57-13-6    CH4N2O    60.06    200mg
L-鳥氨酸鹽酸鹽    L(+)-Ornithine hydrochloride    3184-13-2    C5H13ClN2O2    168.62    20mg
三聚氰胺    Melamine    108-78-1    C3H6N6    126.12    200mg
L-    L-Threonine    72-19-5    C4H9NO3    119.12    20mg
L-    L-Serine    56-45-1    C3H7NO3    105.09    20mg
L-天冬氨酸    L(+)-Asparagine monohydrate    5794-13-8    C4H10N2O4    150.13    20mg
天冬酰胺    "L-Aspartic acid
"    56-84-8    C4H7NO4    133.1    20mg
    Ubenimex    58970-76-6    C16H24N2O4    308.37    20mg
維生素A    Vitamin A    68-26-8    C20H30O    286.45    20mg
維生素C    Vitamin C    50-81-7    C6H8O6    176.12    20mg
維生素E    Vitamin E    13959-02-9    C6H4BrNO2    202.01    20mg
維生素B12    Vitamin B12    68-19-9    C63H88CoN14O14P    1355.37    20mg
維生素K3    Menadione    58-27-5    C11H8O2    172.18    20mg
L-纈氨酸    L-Valine    72-18-4    C5H11NO2    117.15    20mg
    Nicotinamide    98-92-0    C6H6N2O    122.12    20mg
    Nicotinic acid    59-67-6    C6H5NO2    123.11    20mg
L-異    L-Isoleucine    73-32-5    C6H13NO2    131.17    20mg
月桂氮卓酮    Laurocapram    59227-89-3    C18H35NO    281.48    50mg
組氨酸    L-Histidine    71-00-1    C6H9N3O2    155.15    20mg
植酸鈣    Calcium phytate     3615-82-5    C6H6Ca6O24P6    888.41    20mg
植酸鈉    Sodium phytate     14306-25-3    C6H6Na12O24P6    923.82    25mg
植酸鋅    Zinc Phytate    63903-51-5    C6H6O24P6Zn6    1040.280006    20mg
苯乙酸    Phenylacetic acid     103-82-2     C8H8O2    136.15    20mg
胞嘧啶    Cytosine    71-30-7    C4H5N3O    111.1    20mg
尿嘧啶    Uracil    66-22-8    C4H4N2O2    112.09    20mg
胸腺嘧啶                    
 阿卡波糖    Acarbose    56180-94-0    C25H43NO18    645.6    20mg
                    20mg
羅    Roxithromycin    80214-83-1    C41H76N2O15    837.05    200mg
阿奇霉素    Azithromycin     83905-01-5    C38H72N2O12    748.98    100mg
雌酚酮    "Estrone
"    53-16-7    C18H22O2    270.37    20mg
次黃嘌呤    6-Hydroxypurine    68-94-0    C5H4N4O    136.11    20mg
黃嘌呤    2,6-Dihydroxypurine    69-89-6    C5H4N4O2    152.11    20mg
鳥嘌呤    Guanine    73-40-5    C5H5N5O    151.13    20mg
肌苷    Inosine    58-63-9    C10H12N4O5    268.23    20mg
腺嘌呤    Adenine    73-24-5    C5H5N5    135.13    20mg
     Calcium pantothenate    137-08-6    C18H32CaN2O10    476.53    20mg
 富馬酸     Fumaric acid     110-17-8     C4H4O4    116.07    20mg
甘露醇    Mannitol    87-78-5    C6H14O6    182.17    20mg
骨化二醇    Calcifediol    63283-36-3    C27H44O2    400.64    20mg
骨化三醇    Calcifediol    19356-17-3    C27H44O2    400.64    10mg
 L-色氨酸     L-Tryptophan    73-22-3     C11H12N2O2    204.23    20mg
維生素B2    Vitamin B2    83-88-5    C17H20N4O6    376.36    20mg
天冬酰胺    "L-Aspartic acid
"    56-84-8    C4H7NO4    133.1    20mg
維生素D3    Vitamin D3                20mg