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特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基的問(wèn)題解答

時(shí)間:2015-8-10閱讀:321
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    培養(yǎng)某一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEMM199中同樣很容易生長(zhǎng)??傊?/span>MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始,各種目的無(wú)血清培養(yǎng)AIM V12005培養(yǎng)基SFM)。

1.L-*在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?
    L-*在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后,L-*可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-*在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解,但是確切的降解率一直沒(méi)有zui終定論。L-*的降解導(dǎo)致氨的形成,而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。

2.GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I?這個(gè)二肽有多穩(wěn)定?
    GlutaMAX-I 二肽是一個(gè)L-*的衍生物,其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-*來(lái)保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-*供利用。

    GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解,如果在相同條件下,L-*幾乎*降解。

3.什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?
    酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類(lèi)反應(yīng),培養(yǎng)細(xì)胞,尤其是哺乳類(lèi)細(xì)胞時(shí),用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè),一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

    酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,堿性時(shí)為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類(lèi)反應(yīng),培養(yǎng)細(xì)胞,尤其是哺乳類(lèi)細(xì)胞時(shí),用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè),一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí),不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

4.如何用臺(tái)盼蘭計(jì)數(shù)活細(xì)胞?
    用無(wú)血清培養(yǎng)基把細(xì)胞懸液稀釋到2002000個(gè)/毫升,在0.1毫升的細(xì)胞懸液中加入0.1毫升的0.4%的臺(tái)盼蘭溶液。輕輕混勻,數(shù)分鐘后,用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞。活細(xì)胞排斥臺(tái)盼蘭,因而染成藍(lán)色的細(xì)胞是死細(xì)胞。

5.如何消除組織培養(yǎng)的污染?
    當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí),研究者可能試圖消除或控制污染。首先,確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母,把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開(kāi),用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái),檢查HEPA過(guò)濾器。

    高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性,因而,做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂(lè)菌素時(shí)尤其重要。



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