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江蘇科特為您推薦確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟

時間:2015-8-27閱讀:340
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1.

在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞,稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度。

2.

分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如,兩性霉素B推薦下列濃度,0.25,0.50,1.0,2.04.0,8.0 mg/ml。

3.

每天觀測細胞毒性指標,如脫落,出現(xiàn)空泡,匯合度下降和變圓。

4.

確定抗生素毒性水平后,使用低于毒性濃度23倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞23代。

5.

在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代。

6.

重復(fù)步驟4。

7.

在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)46代,確定污染是否以已被消除。

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