人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT) ELISA試劑盒
(2)過碘酸鹽氧化法:本法只適用于含糖量較高的酶。辣根過氧化物酶的標(biāo)記常用此法。反應(yīng)時(shí),過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基很活潑,可與蛋白質(zhì)上的氨基形成Schiff氏堿而結(jié)合。酶標(biāo)記物按克分子比例聯(lián)結(jié),其*比例為:酶/抗體=1-2/1。此法簡便有效,一般認(rèn)為是HRPzui可取的標(biāo)記方法,但也有人認(rèn)為所有試劑較為強(qiáng)烈,各批實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易重演。
按以上方法制備的酶結(jié)合物一般都混有未結(jié)合物的酶和抗體。理論上,結(jié)合物中混有的游離酶一般不影響ELISA中zui后的酶活性測定,因經(jīng)過*洗滌,游離酶可被除去,并不影響zui終的顯色。但游離的抗體則不同,它會(huì)與酶標(biāo)抗體競爭相應(yīng)的固相抗原,從而減少了結(jié)合到固相上的酶標(biāo)抗體的量。因此制備的酶結(jié)合物應(yīng)予純化,去除游離的酶和抗體后用于檢測,效果更好。純化的方法很多,分離大分子化合物的方法均可應(yīng)用。硫酸銨鹽析法zui為簡便,但效果并不理想,因?yàn)榇朔ㄖ荒苋コ粼谏锨逯械挠坞x酶,但相當(dāng)數(shù)量的游離抗體仍與酶結(jié)合物一起沉淀而不能分開。用離子交換層析或分子篩分離更為可取,高效液相層析法可將制備的結(jié)合物清晰地分成三個(gè)部分:游離酶、游離抗體和純結(jié)合物而取得*的分離效果,但費(fèi)用較貴。
人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT) ELISA試劑盒
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