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制備高特異性和價的熒光抗體
標本只有在用熒光探針標記的前提下才能進行共聚焦顯微鏡檢測.制備高特異性和價的熒光抗體是檢測的關鍵。這就要求選用高質(zhì)量的熒光素和高特異性與價的免疫血清。同時還要對熒光抗體進行質(zhì)量鑒定,主要是進行特異性和敏感性鑒定。
標本制作要求
1.標本厚度 組織 切片或其他標本不能太厚,否則激發(fā)光多數(shù)消耗在標本下部,而物鏡觀察的上部不能被充分激發(fā)。
2.載玻片 載玻片要光潔,無自發(fā)熒光;載玻片厚度應在0.8~1.2mm之間,太厚會吸收較多的光,不能使激發(fā)光在標本上聚焦。
3.封固劑 甘油必須無色透明,無自發(fā)熒光。由于熒光在pH 8.5~9.5時較亮,不易很快退去,常用甘油加入0.5mol/lpH 9.0~9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液封片??贵w
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