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培養(yǎng)細(xì)胞為啥總是一言不合就抱團(tuán)

時間:2019-11-1閱讀:1446
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細(xì)胞為啥總是一言不合就抱團(tuán)生長?是細(xì)胞污染了還是正常現(xiàn)象?是消化不好了還是鋪板有問題?抱團(tuán)細(xì)胞越來越多,怎么樣才能讓細(xì)胞分開生長?細(xì)胞抱團(tuán)一定代表細(xì)胞狀態(tài)不好嗎?

 

細(xì)胞生長的時候肯定是要相互lian系,大部分的細(xì)胞都是要成片生長的,應(yīng)該仔細(xì)觀察每種細(xì)胞的狀態(tài),抱團(tuán)并不一定代表不好:

1,若細(xì)胞輪廓清晰,可看清楚一個個的細(xì)胞,像葡萄一樣,一串串的,就是狀態(tài)好的,說明細(xì)胞在分裂。

2,但大部分細(xì)胞抱團(tuán)不是一件好事!如果輪廓消失,出現(xiàn)細(xì)胞融解或細(xì)胞變灰暗、透光性變差,就是細(xì)胞死亡了。葡萄狀和抱團(tuán),在鏡下其實(shí)很容易區(qū)別。抱團(tuán)死亡的細(xì)胞可以看到細(xì)胞碎片,如下圖:

3,細(xì)胞抱團(tuán)是因?yàn)榧?xì)胞污染了嗎?一般細(xì)胞培養(yǎng)液清亮,就不是污染。如果是污染了的話,你看培養(yǎng)液顏色就能夠看出來,很渾濁的那種。


細(xì)胞為啥總是喜歡抱團(tuán)?

1,細(xì)胞死亡釋放出DNA,纏繞其他細(xì)胞,形成黏性的細(xì)胞團(tuán)(消化的過程可能過于粗暴,吹打太用力,消化太久,消化液太強(qiáng)或有毒性等)。

2,細(xì)胞離心速度過大或時間太長。

3,消化不*的時候,細(xì)胞和細(xì)胞之間的連接沒有分開;消化過度的時候,圓形的細(xì)胞容易聚堆,再分開很困難!

4,狀態(tài)不好、老化的細(xì)胞,也可能會出現(xiàn)抱團(tuán)生長的情況(比如換液不及時、長的太滿才傳代、污染等造成的細(xì)胞狀態(tài))。

5,傳代后細(xì)胞鋪板不均勻。


如何避免細(xì)胞抱團(tuán)?

1,用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細(xì)胞。

2,對于貼壁非常牢固的細(xì)胞(如MDCK),為了細(xì)胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,建議分多批多次消化,這樣才能da限度地將胰酶對細(xì)胞的損傷降到低,保證細(xì)胞的狀態(tài)能夠you。

3,細(xì)胞生長密度不要太高,70%-80%就好(細(xì)胞剛剛基本成單層細(xì)胞,沒有出現(xiàn)成層生長),這樣細(xì)胞抱團(tuán)的幾率就大大減少了。如果細(xì)胞已經(jīng)長成集落,可先將細(xì)胞低密度傳代,第二天再消化傳代,這樣連續(xù)傳三次,細(xì)胞抱團(tuán)的就越來越小,這樣幾代過后,再按照常規(guī)消化方法和時間能將細(xì)胞逐漸傳成單個的。

4,消化過程中hao不要使勁搖動培養(yǎng)瓶,這樣細(xì)胞特別容易成屑樣脫落。細(xì)胞一旦脫落入懸液里就很難再將他吹打成單個(因?yàn)榧?xì)胞沒有受力點(diǎn)了,所以細(xì)胞很難分散開)。所以必須要在細(xì)胞未脫落之前將其吹打開,嚴(yán)格控制好消化程度。


細(xì)胞抱團(tuán)了,要如何處理?

1,如果細(xì)胞抱團(tuán)不影響生長就沒問題,只是計(jì)數(shù)的時候要麻煩點(diǎn)了。在消化的時候在細(xì)胞由多角形變成圓型之前,就用手輕磕培養(yǎng)瓶的側(cè)壁,使細(xì)胞從壁上脫落,就可以了!——hao不要吹打,對細(xì)胞性狀和生長都不好。

2,如果感覺有死細(xì)胞的DNA,在細(xì)胞懸液中加入幾滴無菌的DNAse(1mg/ml溶于水)將DNA鏈打斷。輕柔地吹打細(xì)胞,防止對細(xì)胞膜造成物理損傷。

3,如果細(xì)胞抱團(tuán)是肉眼可見的,那就讓細(xì)胞靜置半分鐘左右,然后吸取上半部分沒有抱團(tuán)的細(xì)胞懸液來傳代。如果細(xì)胞抱團(tuán)肉眼不可見,那可能沒有特別好的分離方法,只能等細(xì)胞狀態(tài)改善后將這部分細(xì)胞慢慢排除出去。

 

總結(jié)

引起細(xì)胞抱團(tuán)的根本原因是細(xì)胞狀態(tài)變差,且在吹打細(xì)胞的時候,那些狀態(tài)好的細(xì)胞也會因?yàn)槎啻未荡蚨軗p,所以我們認(rèn)為根本的解決方法是摸透培養(yǎng)的細(xì)胞的生長習(xí)性,讓細(xì)胞保持較好的生長狀態(tài)。

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